【摘 要】
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目的:通过体外实验,探究散结消瘤方对乳腺癌4T1细胞的影响,并探究散结消瘤方是否作用于TGF-β/Smads通路从而抑制上皮间质转化机制。方法:首先进行乳腺癌鼠源4T1细胞的体外培养,传代后取对数生长期的细胞进行相关试验。1.进行CCK-8法试验,分成散结消瘤方含药血清组（5%、10%、15%、20%）与含药血清不同浓度相对应的空白血清组、对照组,探究散结消瘤方含药血清对4T1细胞增殖抑制的影响。
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目的:通过体外实验,探究散结消瘤方对乳腺癌4T1细胞的影响,并探究散结消瘤方是否作用于TGF-β/Smads通路从而抑制上皮间质转化机制。方法:首先进行乳腺癌鼠源4T1细胞的体外培养,传代后取对数生长期的细胞进行相关试验。1.进行CCK-8法试验,分成散结消瘤方含药血清组（5%、10%、15%、20%）与含药血清不同浓度相对应的空白血清组、对照组,探究散结消瘤方含药血清对4T1细胞增殖抑制的影响。2.根据CCK-8法试验结果决定散结消瘤方含药血清对乳腺癌4T1细胞的干预浓度,再进行TRANSWELL迁移试验、TRANSWELL侵袭试验,对比含药血清干预后4T1细胞的运动迁移侵袭能力。3.收集不同浓度散结消瘤方含药血清干预后的4T1细胞,通过WESTERN BLOT蛋白免疫印迹法反映4T1细胞中的TGF-β/Smads通路特征蛋白Smad2/3蛋白及上皮间质转化相关特征蛋白E-钙粘蛋白（E-cadherin）、N-钙粘蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的水平。结果:1.经不同浓度散结消瘤方含药血清干预的4T1细胞用CCK-8法检测后发现,10%浓度的含药血清对4T1细胞的抑制效果最为稳定,随时间延长逐步抑制率逐渐上升,而15%浓度含药血清在72h的干预细胞增殖效果最佳（P＜0.05）,由此根据后续试验的干预时间长度,选择散结消瘤方含药血清的干预浓度为10%、15%。2.TRANSWELL迁移试验验证10%散结消瘤方含药血清组干预4T1细胞相较空白血清组,运动能力明显下降,散结消瘤方含药血清组的细胞数量为（74.00±24.43）个,空白血清组穿过膜的细胞数量为（172.30±37.87）个,迁移率为42.94%,组间统计学存在差异;TRANSWELL侵袭试验验证10%散结消瘤方含药血清组干预4T1细胞相较空白血清组,侵袭能力明显下降,散结消瘤方含药血清组的细胞数量为（86.80±64.01）个,空白血清组穿过膜的细胞数量为（425.20±112.30）个,侵袭率为20.41%,组间统计学存在差异。3.WESTERN BLOT蛋白印迹实验结果所示,10%、12.5%、15%的散结消瘤方含药血清干预组中,TGF-β/Smads信号通路中关键蛋白Smad2/3均下调（P＜0.05）,上皮间质转化相关蛋白E-钙粘蛋白（E-cadherin）上调（P＜0.05）、N-钙粘蛋白（N-cadherin）下调（P＜0.05）、波形蛋白（Vimentin）下调（P＜0.05）。结论:1.散结消瘤方可以抑制乳腺癌4T1细胞增殖。2.散结消瘤方可以抑制乳腺癌4T1细胞的运动及侵袭能力。3.散结消瘤方对EMT的调控作用可能通过下调通路TGF-β/Smads以降低间质表型标记蛋白水平、提高上皮表型标记蛋白来实现。
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