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研究背景及目的:
恶性肿瘤导致病人死亡的主要原因是瘤细胞的播散及广泛转移,抑制和阻断肿瘤细胞的转移是成功治疗恶性肿瘤的关键所在。因此对恶性肿瘤转移机制的研究是多年来研究的热点。MTA1(metastasis associated gene 1)是已知与肿瘤转移相关、具有去乙酰活性的分子。有研究证明肿瘤转移相关基因1(MTA1)在转移性前列腺癌中选择性高表达,但是缺乏相关分子机制的研究。本实验通过对前列腺癌高低转移配对细胞株PC-3M-1E8和PC-3M-2B4中MTA1的表达水平进行正反两个方面的干预,在体外细胞水平上研究MTA1对前列腺癌侵袭转移能力的影响,探讨其中可能的分子机制,为前列腺癌的基因靶向治疗提供新的治疗靶点。
方法:
通过RT-PCR检测高低转移配对细胞株PC-3M-1E8和PC-3M-2B4中MTA1mRNA的表达情况;选择低表达MTA1细胞株2B4进行MTA1正义转染,经G418筛选出稳定表达的阳性细胞克隆;同时选择高表达MTA1细胞株1E8进行siRNA反义干预;利用Western blot分别验证转染和干预前后蛋白水平的变化;通过划痕实验、Transwell实验检测细胞侵袭运动的改变;共聚焦显微镜成像观察细胞骨架的变化;黏附实验观察细胞黏附能力的改变。
结果:
1、MTA1在高低转移前列腺癌细胞株PC-3M-1E8和PC-3M-2B4中表达差异明显,在1E8中表达强度明显高于2B4。
2、正义转染和反义干预后通过Western blot的方法验证MTA1蛋白水平的变化,有明显的统计学意义,说明MTA1成功转染至1E8细胞、siRNA反义干预2B4效率明显。
3、划痕实验、Transwell说明MTA1能明显增强细胞的侵袭转移运动能力。
4、Confocol发现MTA1能使骨架极性增强和微管微丝聚集。
5、黏附实验说明MTA1可以抑制细胞间的黏附。
结论:
在前列腺癌高低转移潜能配对细胞株中,采用基因转染和RNA干预技术相结合,通过侵袭转移、骨架染色、黏附等实验验证了MTA1在侵袭转移中的作用。结果显示,随MTA1的表达增高,前列腺癌细胞的侵袭能力明显增强,同时反义干预后侵袭能力可以得到逆转;并且我们发现MTA1与细胞的黏附能力成负相关,此结论在以往有关前列腺癌的研究中未见报道。细胞黏附能力通常由多种黏附分子共同调控,MTA1与黏附分子之间的关系有待进一步的深入研究。在以往的研究中,虽已通过免疫组织化学及基因芯片的方法证明了MTA1与前列腺癌的转移密切相关,但其分子机制仍然不明确。本研究主要在分子机制上进行初步探讨,期望能为前列腺癌的基因靶向治疗提供一定的参考价值。