纳米金非侵入性介导外源基因进入小鼠早期胚胎细胞的研究

来源 :阜阳师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong502
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将特定的外源基因导入真核细胞中,并整合到受体细胞基因组中得到稳定表达的技术,称为基因导入,它是改变生物遗传性状的根本途径。目前,显微注射是目前使用较为广泛的基本技术,它的优势是基因导入效果相对稳定,成功率也比较高。但是,实现这些优点需要熟练的技术人员和拥有昂贵的实验仪器。同时,在显微镜下通过精细的操作来避免卵母细胞的损伤和精确的控制DNA注射量来确保卵母细胞的安全都是有相当困难的,并且只能够一个接一个的进行注射,处理样品的数量有限。因此,传统的将外源基因物质转入胚胎细胞的方法已不能满足当前研究的要求,特别是利用CRISPR/Cas9进行基因编辑和RNA干扰进行基因沉默等技术的进步,也迫切的需要一种新的方法来取代传统的技术方法。本研究使用聚乙烯亚胺(PEI)包裹的金纳米粒子(AuNPs)负载质粒DNA成功的构建出了一种行之有效的基因载体系统,在尽量减轻胚胎细胞所受伤害的同时降低了技术难度。本研究将小鼠受精卵在含有AuNPs@PEI@DNA载体复合物(APD)的KSOM培养基中培养,培养至囊胚形成后植入假孕母鼠体内,从而获得转基因后代。通过荧光观察,证实了GFP在早期胚胎细胞中的表达,并且通过分析基因分型、免疫荧光检测和DNA测序鉴定等实验数据,证明GFP序列确实整合到了后代个体的染色体中并得到表达。此外,TUNEL试验和囊胚细胞分化分析表明APD对小鼠早期胚胎发育具有良好的安全性。这些结果表明,AuNPs基因载体作为传统显微注射的替代技术,无需昂贵的仪器设备和熟练的技术人员,就可以简单有效地将外源基因物质导入小鼠早期胚胎细胞中,将极大地促进生命科学各个方面的研究。
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