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目的: 膨化人参是以生晒参为原料,利用双螺杆挤压技术加工所得的新产品。因膨化人参系人参的新工艺制品,所以关于其成分的变化以及生物学效应研究甚少。本研究在探讨膨化人参的急性毒理学作用后,观察了对啮齿类小动物生长发育、神经系统、运动系统的影响,利用常温常压耐缺氧实验、负重游泳力竭实验、在体骨骼肌收缩力学实验、骨骼生物力学实验和血清学检查,初步对膨化人参的部分生物学作用做了一些研究。本研究将为膨化人参的广泛应用提供可靠的实验依据,也为膨化人参的进一步研究提供新思路。 方法: 实验对象系Spreague-Dawley清洁级雄性大鼠和昆明小鼠。 1.急性毒性实验:在探讨膨化人参的急性毒性实验后,摸索了最大给药量。大鼠18只,随机分为2组(对照组,膨化人参组)。实验前动物禁食不禁水16h,灌胃后禁食不禁水4h。1d内分3次分别给予最大浓度(0.15g/ml),最大胃容量(4ml/100g)的膨化人参悬浮液,两次灌胃间隔6h。 2.学习记忆实验:32只大鼠随机分为膨化人参高、中、低剂量组和对照组,每组各8只。各给药组给予相应剂量(3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg)膨化人参悬浮液,对照组给予等容量蒸馏水,1d一次连续灌胃21d。利用Miorris水迷宫进行定位航行实验和空间探索能力实验。 3.负重游泳力竭实验:将32只大鼠随机分成4组,每组8只,连续灌胃21d。膨化人参组分高、中、低剂量3个组灌胃膨化人参悬浮液(3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg),对照组给予等容量蒸馏水。灌胃结束后,在大鼠尾部1/3-2/3处负重游泳,观察并记录入水后到沉入水下10s不能浮出水面的时间即游泳力竭时间。 4.骨骼肌在体收缩力学实验:取16只大鼠随机分成药物组和对照组,分别灌胃1.5g/kg的膨化人参悬浮液和等容量蒸馏水,每天一次连续灌胃21d。应用电生理学方法,观察电刺激大鼠在体坐骨神经对腓肠肌和比目鱼肌单收缩的潜伏期、最大收缩幅度和1/2最大舒张幅度和强直收缩的潜伏期、最大收缩幅度。 5.骨骼实验:SD大鼠32只,分成膨化人参高、中、低剂量组和对照组。灌胃3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg的膨化人参悬浮液和等容量蒸馏水,每天一次连续灌胃21d。部分实验中只设最佳给药剂量组和对照组。待灌胃结束第2d,手术取材。 ①骨骼生长指标:测量股骨长度、直径、股骨/体重比、表观骨密度。 ②股骨的生物力学实验:用 CSS-44100型电子万能试验机(长春试验机研究所有限公司中国),(载荷量程为1000N,分辨力为0.01N,横梁位移分辨力为0.001mm)将-20℃保存的大鼠股骨常温解冻,生理盐水复湿,进行三点弯曲实验。跨距20mm,加载速度5mm/min,通过得到的测试曲线测量并计算出股骨的最大弯曲应力、弯曲能量、弯曲弹性模量和弯曲韧性系数等生物力学参数。 6.常温常压耐缺氧实验:将32只昆明小鼠随机分为膨化人参高、中、低剂量组和对照组,每组8只。分别灌胃膨化人参悬浊液(1.5g/kg、0.75g/kg、0.375g/kg)和蒸馏水。连续灌胃3w后,利用恒压缺氧系统,观察耐缺氧时间以及耗氧量。 7.血液红细胞计数:将实验6的动物灌胃结束后,开胸心脏采血,利用血红细胞计数板在20倍光学显微镜下统计小鼠血红细胞数量。 8.血液生化指标测定: ①抗氧化指标:利用促凝真空采血管心脏采血,分离血清,利用酶联法检测SOD活性、MDA含量。 ②成骨生长肽、骨钙素:采血同抗氧化指标测定,利用酶联免疫法测定。 ③血钙、血磷、碱性磷酸酶:利用促凝真空采血管心脏采血,分离血清,利用全自动生化分析仪检测。 9.统计学处理:采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理,实验数据用Mean± SE表示。进行单因素和双因素方差分析和t检验,设定P<0.05为有统计学意义。 结果: 1.最大耐受量:无法测定膨化人参的半数致死量。在探讨最大耐受量时,大鼠呼吸、进食、体毛、口鼻分泌物、状态及体重均未见明显异常,并且没有发生动物的死亡。膨化人参的最大给药量是0.15g/ml×40ml/kg×3次=18g/kg,是成人每日人参最大常用量9g/60kg的120倍。 2.动物大体病理学改变:各组大鼠一般状态均良好。除了膨化人参大剂量组动物进食量减少以外其他各组动物均无异常。大体病理学检查也未发现明显异常。 3.动物的一般状态:灌胃期间大鼠体重普遍增长。其中中剂量大鼠体重增长最大,但与对照组相比无明显差异,而高剂量组大鼠与对照组相比体重增加率(体重增长率=体重增加量/体重)明显减少(P<0.05)。 4.血清SOD和MDA的影响:膨化人参增加大鼠血清SOD的活性,降低MDA的含量。与对照组相比均有统计学意义(P<0.05)。 5.学习记忆能力的影响: ①定为航行能力的影响:第1和第2d的定位航行试验中动物寻找站台的时间,即寻找站台潜伏期各组之间无显著性差异。但是之后的连续三天内,中剂量大鼠和高剂量组大鼠的寻找站台潜伏期与对照组相比明显缩短(P<0.05)。 ②空间探索能力的影响:撤离站台后,膨化人参的中剂量组动物穿越站台的次数明显增多(P<0.05)。 6.对耐缺氧能力的影响: ①死亡时间:膨化人参大剂量组小鼠耐缺氧时间由对照组的19.48±0.58 min增加到23.70±0.62min,具有显著性差异(P<0.05)。 ②耗氧量:实验组动物的耗氧量均有增加的趋势,其中大剂量组的耗氧量(27.73±0.23ml)明显高于对照组(25.06±0.18ml),P值小于0.05。 ③红细胞数:高剂量膨化人参对红细胞的影响很明显,由正常动物的8.12±0.31x1012增加到11.93±0.34x1012(P<0.05)。 7.对骨骼肌收缩能力的影响: ①对骨骼肌重量的影响:实验用测定心肌和腓肠肌干重/湿重百分比的方法,观察了膨化人参对骨骼肌和心脏重量的影响,但是均未见明显差异(P>0.05)。 ②游泳力竭能力的影响:膨化人参中剂量组大鼠游泳力竭时间明显长于对照组(P<0.05)。 ③在体骨骼肌收缩能力的影响:膨化人参能使大鼠腓肠肌和比目鱼肌的单收缩和强直收缩的潜伏期缩短,最大收缩幅度显著增加,同时强直收缩的1/2舒张时间明显延长,与对照组比较其差异均显著(P<0.05)。 8.对股骨生长和力学效应的影响: ①股骨生长的影响:膨化人参高、中、低3个剂量组动物的股骨(mg)/体重(g)比均有增加倾向。分别为2.44±0.06、2.37±0.05、2.33±0.05,与对照组(2.18±0.03)比较,高、中两个剂量组的P值小于0.05,具有统计学意义。接着选择效果明显的中剂量组,观察了大鼠股骨长度、直径、体积和骨密度的变化。发现,除了骨密度以外其他各项指标均大于对照大鼠(P<0.05)。另外,虽然膨化人参组股骨的密度与对照组相比没有明显的差异(P>0.05),但是却有提高趋势。 ②股骨生物力学效应的影响:利用材料力学研究方法,通过三点弯曲试验探讨了股骨的生物力学指标的变化。发现,膨化人参中剂量组大鼠股骨最大弯曲应力、弯曲弹性模量、弯曲能量、和弯曲韧性系数均大于对照组大鼠(P<0.05)。提示,中剂量膨化红参明显提高大鼠股骨生物力学抗压韧性。 ③对血钙、血磷和碱性磷酸酶的影响:膨化人参组的各项指标均明显高于对照组(P<0.05)。 ④对成骨生长肽(OGP)和骨钙素(BGP)的影响:膨化人参组动物血液中OGP和BGP明显高于对照组且有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1.膨化人参无明显的药物毒性,其大鼠的最大耐受量是18g/kg; 2.膨化人参具有改善大鼠学习记忆、骨骼肌的运动和携氧能力; 3.膨化人参有利于大鼠骨骼的生长并提高其生物力学性能,这种作用可能与其提高碱性磷酸酶、成骨生长肽和骨钙素水平有关; 4.膨化人参对正常大鼠的药理学作用机制可能是多靶点,其具体的机制有待进一步探讨。