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根据文献报道的Lipomyces Starkeyi葡聚糖酶基因(LSD1)的序列克隆了该基因,为达到该基因的高效表达克隆了酵母磷酸甘油酸激酶启动子(PGKlp),构建了由PGKlp启动的LSD1表达盒。此表达盒通过插入失活pYILV4中ILV2的基因,构建了重组整合质粒pYIPL4。酶切质粒pYIPL4获得两端含有ILV2基因部分序列以及葡聚糖酶基因表达盒的DNA片断,用该片断转化啤酒酵母工业菌株YSF5,以dextran T-70为唯一碳源的YNBD培养基对转化子进行筛选,获得具有葡聚糖酶活性,低α-乙酰乳酸合成酶(AHAS)活性的啤酒酵母工程菌菌株T1和O9。通过分子生物学和生物化学方法鉴定,并对其进行遗传稳定性检测,检测结果为100%稳定。在15天的低温模拟发酵实验中,分别对葡聚糖酶、α-乙酰乳酸合成酶活性以及乙偶姻含量进行了测定,分析结果表明转化子在发酵过程中具有稳定的分泌葡聚糖酶的能力,并且其α-乙酰乳酸合成酶活性以及乙偶姻的产量都明显低于受体菌YSF5。此外转化子的发酵性能优于受体菌YSF5,表明作者对其进行的遗传改造提高了其发酵能力。T1和Q9的发酵液中残糖含量在发酵结束时也分别比YSF5降低了20%和25%。
本试验中所用到的DNA元件都来源于酵母菌,比其他相关研究报道中使用的高等动植物、细菌以及其他非酵母种类DNA元件进行的DNA修饰得到的酿酒酵母工业菌株具有更高的生物安全性,更具有实际应用价值。