目的 改良以树脂包埋多块不脱钙小鼠胫骨的方法,探索对树脂包埋不脱钙骨组织切片时预防脱片的有效方法。方法取15只13周龄的雄性B6小鼠,间隔3天腹腔注射钙黄绿素2次,并于第2次注射后2天处死小鼠,以福安马林溶液固定小鼠胫骨,随后梯度乙醇脱水并进行树脂渗透液充分渗透。以树脂包埋液将小鼠胫骨包埋于直径4mm的圆柱形树脂块中,待树脂凝固后于胫骨近端1/4处切断,并对剩余3/4胫骨进行再次包埋。再包埋时将5个胫骨切面贴于平整树脂板并包埋于同一树脂块中。在包埋、切片及染色前随机将样本分为对照组及实验组,分别采用三种方案处理并观察相应指标,包括:①向未凝固树脂包埋液冲入二氧化碳,观测树脂包埋液的凝固时间;②每次切片前在切面均匀涂抹未凝固的树脂包埋液,观测每次切片后的脱片率,比较对钙黄绿素荧光定量分析的结果;③在对切片进行脱塑水化染色处理前以95oC加热15分钟,观测脱塑水化后的脱片率,比较甲苯胺蓝染色的效果及对成骨细胞定量分析结果。结果一共包埋6个树脂块,每个树脂块内有5个小鼠未脱钙胫骨,每个树脂块内所有胫骨的起始切面均为胫骨近端1/4处,所有树脂块凝固完全,硬度适于切片。通过向未凝固的树脂包埋液冲入二氧化碳可以缩短树脂块的凝固时间,实验组树脂块在4小时后全部凝固完全(n=10),对照组树脂块在72小时后凝固完全有7个,3个树脂块未能凝固。切片前在树脂块切面表面涂抹未凝固的树脂包埋液可以有效地预防脱片的发生,实验组切片平均脱片率为11.25%±0.06,显著低于对照组切片平均脱片率67.5%±0.12(p<0.001)。涂抹树脂包埋液不会影响钙黄绿素荧光分析(p>0.05)。在脱塑水化前对切片进行加热处理可以显著降低脱塑水化后的脱片率,实验组切片水化后平均脱片率为28.97%±0.29,显著低于对照组切片水化后平均脱片率56.60%±0.22(p<0.01)。加热切片并不会影响甲苯胺蓝染色以及成骨细胞定量分析结果(p>0.05)。结论通过分两步的方式可以有效地将复数的不脱钙小鼠胫骨包埋于一个树脂块中,每次可以对复数的小鼠胫骨进行同时切片,提高了获得切片的效率。向未凝固的树脂包埋液冲入二氧化碳可以缩短树脂块凝固的时间,提高了树脂块制作的效率。在树脂块表面涂抹未凝固树脂包埋液后再进行切片可以显著降低切片组织的脱片率,并且不会影响对骨形成指标的定量分析。加热切片后再进行脱塑水化及染色,不仅可以降低水化后的脱片率,还不会影响成骨细胞的定量分析。改良后的小鼠不脱钙胫骨树脂包埋法有效可行,这一方法可能是一种理想的不脱钙骨组织研究方法。