论文部分内容阅读
目的以发酵食品中分离、鉴定的乳酸菌为研究对象,检测乳酸菌对几种常见抗生素药物敏感性情况,探讨其表现型耐药、基因型耐药及其生物成膜形成关系,分析乳酸菌耐药的机理及其涉及的食品安全问题。方法采用生理生化及16SrDNA序列测序分析对分离菌株进行种属鉴定。采用纸片法和平板稀释法进行定性和定量分析乳酸菌对氨苄青霉素(AM)、万古霉素(V)、链霉素(S)、红霉素(T)和四环素(TE)五种抗生素药物敏感性。并采用PCR检测技术分析菌株可能携带的抗生素耐药基因。利用微孔板结晶紫染色法检测乳酸菌生物成膜能力,并检测生物被膜形成菌对药物的敏感性(BIC),运用SPSS13.0软件独立样本t检验方法探讨其抗生素耐药与乳酸菌生物成膜能力之间的关系。结果在来自传统的发酵食品中分离筛选出53株乳酸菌,并鉴定其种属为：乳酸乳球菌12株,干酪乳杆菌21株,鼠李糖乳杆菌10株,保加利业乳杆菌1株,嗜热链球菌9株。药敏实验结果显示,所有菌株对链霉素耐药,37株对万古霉素耐药,7株对四环素和红霉素耐药,6株对氨苄青霉素耐药。不同种属的乳酸菌对5种抗生素表现为不同程度耐药,并且有些菌株表现为对几种抗生素耐药。并未检测到相应抗生素的耐药基因。在生物被膜的形成能力检测中,其中32株乳酸菌具有不同的生物成膜能力。14株表现为弱成膜能力,8株表现为中强成膜能力,10株表现为强成膜能力。所有的菌株对链霉素和万古霉素表现高水平耐药,MIC范围为0.256-4.096mg/ml。而大多数菌株对氨苄青霉素敏感,其MIC范围为0.004-0.016mg/ml。所有菌株对所有抗生素的BIC均大于MIC。19株(59.3%,19/32)菌株对氨苄青霉素的BIC比MIC大256-1024倍；18株(56.3%)对红霉素的BIC比MIC大128-512倍,17株(53.1%)对四环素的BIC比MIC大256-512倍；20株(62.5%)对万古霉素的BIC比MIC大2-4倍；19株(59.4%)对链霉素的BIC比MIC大7.8-15.6倍。这表明乳酸菌成膜后增强对抗生素的耐药性,且对不同抗生素增强耐药幅度不同。统计学分析结果显示,除万古霉素外,乳酸菌对抗生素耐药与其生物成膜能力有关。结论来自发酵食品中的乳酸菌,对不同抗生素的敏感性具有种属特性；生物被膜的形成可以增强乳酸菌对抗生素的抵抗能力,但是不同抗生素增强的抵抗力大小与抗生素种类密切相关。