目的1.建立高盐高脂饮食诱导的盐敏感性高血压大鼠模型,并观察模型大鼠是否存在肾素-血管紧张素系统激活,以及是否伴有胰岛素抵抗等状态；2.研究补肾中药对盐敏感性高血压模型大鼠血压以及肾素-血管紧张素系统和肾功能等指标的影响,了解其是否能降低模型大鼠血压、抑制肾素-血管紧张素系统激活以及对肾功能是否有改善作用；3.研究补肾中药对盐敏感性高血压模型大鼠伴有的胰岛素抵抗、促炎、促凝状态等的影响,观察中药对这些病理状态是否有改善作用；4.通过研究补肾中药对肾素-血管紧张素系统与胰岛素抵抗等环节的影响,探讨中药可能的作用机制,为盐敏感性高血压的治疗探索可行途径,阐明“咸入肾”理论的科学内涵。方法1.高盐高脂饮食诱导的盐敏感性高血压大鼠模型的建立。清洁级SD大鼠30只,雄性,6周龄。适应性饲养10天,随机分为4组：正常饲料组(CON)5只,高盐组(HS)5只,高脂组(HF)5只,高盐高脂组(HSF)15只。各组大鼠自由饮水,分别对应给予普通饲料、高盐饲料、高脂饲料和高盐高脂饲料。每周用尾套法测血压,2周后,隔夜空腹12小时,用毛细管眼眶后静脉丛采血,测血糖、胰岛素、血脂、肾素活性、血管紧张素Ⅱ、血管紧张素Ⅰ转化酶,计算HOMA-IR、ISI;代谢笼收集24小时尿液,测尿钠、尿钾、尿醛固酮、尿微量白蛋白,计算大鼠24h尿微量白蛋白排泄率。2.研究补肾中药对盐敏感性高血压模型大鼠血压、肾素-血管紧张素系统和肾功能等的干预作用。动物分组：在饮食干预2周后,将高盐高脂组(HSF)大鼠随机分为3组,每组5只大鼠：HSF组(不予药物干预)、缬沙坦组(VAL)和六味地黄组(LW),连同原来的正常饲料组,共为4组。缬沙坦剂量为13.33mg/kg/d(体重),六味地黄组剂量为8.13g/kg/d(体重)。缬沙坦、六味地黄方每天灌胃1次,持续6周。实验过程中,正常饲料组大鼠予普通饲料,其余各组大鼠均继续给予高盐高脂饲料。每周测体重、用尾套法测量血压。药物干预后的第6周,隔夜空腹12小时后采血,测血液中肾素活性、血管紧张素Ⅱ、血管紧张素Ⅰ转化酶；代谢笼收集24小时尿液,测尿量、尿钠、尿钾、尿醛固酮、尿微量白蛋白,计算大鼠24小时尿钠、尿钾排泄量以及24小时尿微量白蛋白排泄率等。取肾脏组织-80℃冻存,RT-PCR检测Renin、AngⅡ、AT1R,并做石蜡包埋切片,HE染色,进行组织病理学形态观察。3.研究补肾中药对盐敏感性高血压模型大鼠伴有的胰岛素抵抗及促炎、促凝状态等的作用。动物分组和造模方法同前。饮食干预8周(药物治疗6周)后,隔夜空腹12小时后采血,生化法检测血液中血糖、血脂四项(TC、TG、HDL-c、LDL-c)等；ELISA法检测血液中胰岛素、瘦素(LEP)、脂联素(ADP)、组织纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏子因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、游离脂肪酸(FFA)等,计算HOMA-IR和ISI。结果1.高盐高脂饮食诱导的盐敏感性高血压大鼠模型的建立。与正常饲料组大鼠相比,各组大鼠在高盐或／和高脂饮食干预2周后,血压显著升高,其中高盐高脂组血压升高最多(119.4±4.7vs.94.0±2.2mniHg, p<0.05);经过饮食干预2周后,高盐高脂组血AngⅡ显著降低(66.39±3.62vs.82.16±14.68ng/L,p<0.05),其它循环RAS组分(PRA、ACE)变化不大。在尿电解质方面,高盐高脂组24小时尿钠排泄量显著升高(1.92±0.48vs.0.75±0.18mmol/L,p<0.05),24小时尿钾排泄量显著升高(1.49±0.23vs.0.98±0.28mmol/L,p<0.05),尿钾／尿钠比值较正常饲料组显著降低(0.80±0.16vs.1.35±0.49,p<0.05)。高盐高脂组尿微量白蛋白排泄率显著升高(22.16±4.01vs.6.66±1.17ug/L,p<0.05)。在胰岛素敏感性方面,与正常饲料组大鼠相比,各组大鼠在高盐或／和高脂饮食干预2周后,空腹血糖显著升高,其中高盐高脂组升高最明显(3.66±0.39vs.2.60±0.52mmol/L,p<0.05);空腹血胰岛素水平与血糖水平的变化趋势基本相同,同样是高盐高脂组升高最明显(3.83±0.29vs.2.99±0.23mIU/L,p<0.05);高盐高脂组HOMA-IR显著升高(p=0.000),ISI显著降低(p=0.001)。上述血压、循环RAS活性、肾脏功能和胰岛素敏感性等方面指标的结果表明：高盐高脂饮食诱导盐敏感性高血压大鼠模型成功,可用于本课题的实验研究。2.研究中药对盐敏感性高血压模型大鼠血压以及肾素-血管紧张素系统和肾功能相关指标的影响。经过1周治疗后,与高盐高脂组相比,缬沙坦组(VAL)血压就有显著降低(89.2±4.8vs.117.6±9.3mmHg,p<0.05),在治疗第2周,六味地黄组(LW)显示出降压效果(105.2±8.8vs.118.6±5.3mmHg,p<0.05);治疗6周后,LW显著降低血压至正常水平(103.0±8.1vs.118.4±6.3mmHg,p<0.05)。在循环RAS方面,饮食干预2周,与正常饲料组大鼠相比,高盐高脂组AngⅡ显著降低(66.39±3.62vs.82.16±14.68nG/L,p<0.05),至饮食干预第8周,高盐高脂组AngⅡ较正常饲料组有所下降,但无统计学意义；经过6周药物治疗,LW及VAL均能显著升高AngⅡ浓度。而其它RAS组分如血管紧张素转换酶(ACE)、肾素活性(PRA)各组间无显著差异。饮食干预2周,与正常饲料组大鼠相比,高盐高脂组尿醛固酮(UALD)显著上升(135.02±9.93vs.101.27±13.30ng/L,p<0.05),经过6周药物治疗,LW与VAL均可显著降低UALD至正常水平。在肾脏局部RAS方面,经过8周的高盐高脂饮食干预,与正常饲料组大鼠相比,高盐高脂组大鼠肾脏局部AngⅡ、肾素、血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型(AT1R) mRNA的表达水平都显著升高。经过6周的药物治疗,与高盐高脂组相比,LW能显著抑制肾脏RAS的激活状态,与VAL效果相当。在肾功能方面,经过8周的高盐高脂饮食干预,与正常饲料组大鼠相比,高盐高脂组大鼠24小时尿钠排泄量(p=0.007)、尿钾排泄量显著增多(p=0.017),而尿钾／尿钠比值偏低,提示在高钠摄入的情况下,高盐高脂组大鼠仍存在钠潴留现象；经过6周的药物治疗,与高盐高脂组大鼠相比,LW能促进尿钠的排出及减少尿钾流失,疗效与VAL相当。尿微量白蛋白(MAU)检测结果表明,经过8周的高盐高脂饮食干预,与正常饲料组大鼠相比,高盐高脂组大鼠MAU显著升高(p=0.001)；经过6周的药物治疗,与高盐高脂组相比,LW能显著降低MAU水平(p=0.010),与VAL疗效相当(p=0.008)。。肾脏组织HE染色结果表明,高盐高脂组大鼠可见肾小球入球动脉轻度玻璃样变性,其余各组肾小球入球动脉、小动脉和肾单元未见显著改变。血肌酐、尿素氮各组间无显著差异,说明我们采用的造模方法是造成以血压升高为主伴有轻度肾脏损害的动物模型,与临床上大部分SSHT患者的病变程度相似。3.研究补肾中药对盐敏感性高血压模型大鼠伴有的胰岛素抵抗及其相关机制的作用。在糖脂代谢方面,至饮食干预第8周时,高盐高脂组大鼠血糖和血胰岛素水平进一步升高,与正常饲料组大鼠相比差异显著(分别为5.55±0.62mmol/L vs.2.87±0.77mmol/L, p<0.05和4.92±1.34mIU/L vs.2.79±0.26mIU/L,p<0.05),血脂方面,TC、TG与LDL-c各组之间无显著差异；而经过6周的药物治疗,与高盐高脂组大鼠相比,VAL组的血糖(p=0.000)及血胰岛素(p=0.005)浓度下降至正常,LW的血糖水平显著下降(p=0.000)；ISI及HOMA-IR结果表明,LW与VAL均能改善胰岛素敏感性及降低IR程度(p<0.05)。在相关脂肪细胞因子方面,治疗6周后,高盐高脂组与正常饲料组大鼠相比,瘦素(p=0.047)、PAI-1显著升高(p=0.031),t-PA显著降低(p=0.037)；CRP. TNF-α、IL-6、ADP、FFA各组之间无显著差异。经过6周的药物治疗,与高盐高脂组相比,LW方能显著降低瘦素、PAI-1至正常水平,并升高tPA至正常水平,与VAL疗效相当。结论1.高盐高脂饮食干预可诱导出稳定可靠的盐敏感性高血压大鼠模型,该方法简便易行,较好的模拟了现代饮食习惯,适用于改善盐敏感性高血压药物筛选及机制的研究。2.六味地黄方显著降低盐敏感性高血压模型大鼠血压,疗效与缬沙坦相当；对循环RAS的抑制有良性调节作用,抑制肾局部RAS激活；对该模型大鼠的钠潴留及尿钾流失现象也有改善作用,并减少尿微量白蛋白排泄率。3.六味地黄方显著降低盐敏感性高血压模型大鼠血糖、血胰岛素水平,提高胰岛素敏感性,降低HOMA-IR;对脂肪细胞因子及纤溶功能紊乱有显著的良性调节作用。总之,高盐高脂饮食干预可诱导出稳定可靠的盐敏感性高血压大鼠模型,六味地黄方可用于盐敏感性高血压的治疗,显著降低该模型大鼠血压、抑制肾脏RAS激活及改善IR,其作用机制可能与拮抗肾脏RAS、改善肾功能、改善糖脂代谢紊乱及改善纤溶功能紊乱等有关,体现了中医药多环节、多靶点综合作用的特点,为“咸入肾”及从肾论治盐敏感性高血压提供了可靠的实验依据。