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金黄色葡萄球菌是最常见的化脓性球菌,是引起全球院内感染的重要致病菌。近年来,由于抗生素的滥用,导致多重耐药性金黄色葡萄球菌产生,其致病性不断提高,病死率逐年增加。中性粒细胞作为机体固有免疫系统的重要成员,处于机体抵抗病原微生物入侵,特别是化脓性细菌感染的第一道防线。IL-33是近年来发现的一种具有多种生物学功能活性的细胞因子,在感染性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病中发挥重要的调节作用。本课题拟建立多重耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)感染小鼠模型,研究IL-33在抗感染免疫中的调节作用,并探讨其相关的免疫学机制,为临床上治疗MRSA感染提供新的思路和方向。研究目的:观察IL-33在小鼠MRSA感染模型中的免疫调节作用,并探讨其在抗感染免疫中相关机制;同时结合体外实验,进一步研究IL-33对中性粒细胞杀菌机制的影响,可望阐明抗感染免疫机制及防治多重耐药菌感染提供新的实验依据。研究方法:建立MRSA感染小鼠腹腔与皮肤两种模型,通过给予外源性IL-33处理,观察小鼠死亡率及感染伤口的愈合时间和愈合率,初步判断IL-33的治疗效果。取腹腔感染小鼠血液和腹腔液检测中性粒细胞数目变化,细胞因子水平及细菌分布情况;感染皮肤组织固定切片,组织病理学分析,观察伤口局部新生血管与肉芽组织生成、细菌的负荷量及皮肤感染部位NETs形成。流式细胞术及免疫荧光检测IL-33调节中性粒细胞的杀菌机制。研究结果:1.IL-33对MRSA腹腔感染的保护作用建立小鼠腹腔感染模型,经IL-33治疗后,小鼠的摄食量明显改善,活动增多,反应也较灵敏,小鼠存活率明显增高;外周血及腹腔液中性粒细胞数目升高;外周血、腹腔液及脏器中细菌负荷量降低;同时炎性细胞因子IL-6、IL-17A和TNF-α水平升高。2.IL-33对MRSA皮肤感染的保护作用建立小鼠皮肤感染模型,经IL-33治疗后,皮肤脓肿愈合时间缩短为14天,感染皮肤组织细菌负荷量减少,脓肿部位NETs生成增多。3.IL-33对中性粒细胞杀菌机制的影响IL-33预处理后,中性粒细胞的趋化、吞噬、杀伤功能增加;中性粒细胞呼吸爆发和粘附分子表达增加;PI3K/AKT/m TOR信号通路活化增强;促进中性粒细胞的胞外诱捕网(NETs)生成。结论:IL-33通过多途径调节中性粒细胞生物学活性,增强机体抗MRSA感染的免疫功能。