【摘 要】
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小菜蛾Plutella xylostella属鳞翅目菜蛾科,主要是十字花科蔬菜害虫,在世界上80多个国家都有分布。对我国十字花科蔬菜的生产构成很大威胁。多个国家或地区已报道其对Bt杀虫
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小菜蛾Plutella xylostella属鳞翅目菜蛾科,主要是十字花科蔬菜害虫,在世界上80多个国家都有分布。对我国十字花科蔬菜的生产构成很大威胁。多个国家或地区已报道其对Bt杀虫基因产生高抗药性。蛋白转导结构域{trans-activator of transcription, TAT)是一类能自动穿透细胞膜,并能作为载体将其它生物大分子携带进入细胞膜内的一段富含精氨酸的多肽。本文人工合成一段TAT基因,以实验室保存的cry1Ac杀虫基因为基础,以黄色荧光蛋白(YFP)做为标记基因构建出：pBI121-Cry1Ac、pBI121-TAT-Cry1Ac、pBI121-Cry1Ac-YFP、pBI121-TAT-Cry1Ac-YFP四种重组载体。完成农杆菌介导四种融合基因载体在模式植物烟草、拟南芥遗传转化条件的摸索；通过CrylAc基因特异引物基因组PCR、RT-PCR分子检测和CrylAc毒蛋白Western-blot分析成功筛选转基因烟草和拟南芥阳性克隆植株；提取阳性植株蛋白,利用ELISA分析方法完成融合基因在植株中表达蛋白定量。以抗性与敏感小菜蛾为供试虫源,提取烟草阳性植株蛋白,利用拟南芥阳性植株幼叶进行室内生测,结果表明,蛋白转导结构域TAT对CrylAc有明显的增效和克抗作用,烟草阳性植株表达融合蛋白对敏感小菜蛾增效区间：3.260～3.296,对抗性小菜蛾增效区间：2.107～2.169；拟南芥阳性植株表达融合蛋白对敏感小菜蛾增效区间：3.260～3.296,相对于抗性小菜蛾增效区间：2.107～2.169。
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