论文部分内容阅读
本研究以泰深王鸽为研究对象,研究了 DGAT2、ADSL、FABP1、FABP2和FABP3五个基因多态性及其与屠体和肉质性状的遗传相关,利用荧光定量PCR技术研究了基因在鸽组织中的表达特点,采取组织学切片技术研究了鸽肌纤维发育特征。在此基础上,应用慢病毒介导的RANi技术研究了干扰FABP1、FABP2和FABP3基因对鸽胚胎成纤维细胞增殖和凋亡的影响。主要研究结果如下:1、利用直接测序法对200只4周龄鸽的DGAT2、ADSL、FABP1、FABP2和FABP3五个基因进行了多态性检测和分型,并与屠体及肉质性状进行了关联分析。(1)在DGAT2基因上共检测到了 5个SNP位点,其中有2个位点与鸽屠体及肉质性状有显著相关。在G18398T位点上,AA和AB基因型的腹脂重和腹脂率极显著高于BB基因型(P<0.01),而BB基因型的肌苷酸和肌内脂肪含量极显著高于AA和AB基因型(P<0.01);在G22484C位点上,AA基因型的宰前活重、屠体重、半净膛重、全净膛重和胸肌重极显著高于AB和BB基因型(P<0.01),BB基因型的肌内脂肪含量显著高于AA和AB基因型(P<0.05),但剪切力极显著低于AA和BB型(P<0.01)。(2)在ADSL基因上,共检测到9个SNP位点,其中有2个位点与鸽屠体及肉质性状有显著相关。在G10696A位点上,基因型AA和AB的屠体率极显著高于BB基因型(P<0.01);在C13065G位点上,基因型AA和AB的肌苷酸含量极显著高于BB基因型(P<0.01)。(3)在FABP1基因上,共检测到了 5个SNP位点,其中有3个位点与鸽屠体及肉质性状有显著相关。在T1298C位点上,AA基因型的宰前活重、半净膛重、全净膛重显著高于AB和BB基因型(P<0.05);在G161C位点上,BB基因型的肌苷酸含量显著高于AA基因型(P<0.05),而AB基因型与BB基因型、AA基因型间差异不显著(P>0.05);在C1376T位点上,BB基因型肉色L*值和b*值显著高于AB基因型(P<0.05),BB基因型的肌苷酸含量显著高于AA基因型(P<0.05),而AB基因型的肌内脂肪含量显著高于AA基因型(P<0.05)。(4)在FABP3基因上,共检测到9个SPN位点,其中有3个位点与鸽屠体及肉质性状有显著相关。在C3128T位点,AA基因型的宰前活重、屠体重和全净膛重都显著高于AB和BB基因型(P<0.05);在G3305A位点,基因型AB的肌内脂肪含量显著高于BB基因型(P<0.05);在A3313G位点,基因型AA的肌苷酸含量和肌内脂肪含量极显著高于BB基因型(P<0.01)。(5)在FABP2基因上未检测到突变位点。鸽DGAT2、ADSL、FABP1和FABP3基因多态性显著影响鸽屠体和肉质性状,可作为鸽屠体性状和肉质性状的分子标记辅助选择。2、应用荧光定量PCR技术研究了 0到4周龄鸽DGAT2、ADSL、FABP1、FABP2和FABP3五个基因在心、肝、脾、肺、肾、肌胃、腺胃、胸肌、小肠、脂肪等10个组织中的表达特征。研究结果发现5个基因在不同周龄鸽的各个组织均有不同程度的表达。DGAT2基因在脾脏、腺胃、肺、肝脏和脂肪中有较高的表达量,心脏和胸肌表达量相对较低,且大部分组织在3周龄和4周龄的表达量高于0周龄、1周龄和2周龄;ADSL基因在肌胃、肺和脾中表达量较高,在肝脏中表达量最低;FABP1基因在各个周龄的鸽肝脏中的表达量最高,脂肪和小肠中也有较高的表达量,且表达量逐周升高,心脏和腺胃中表达量较低;FABP2基因在肝脏、小肠、脂肪和脾脏中有较高的表达量,在腺胃和胸肌中表达量较低;FABP3基因在各个周龄的肝脏和脾脏中的表达量都极显著高于其他组织,小肠和脂肪也有较高表达量,心脏、胸肌和腺胃中的表达量相对较低。3、本研究利用组织切片技术首次对0到4周龄的鸽肌纤维发育特征进行了研究,包括肌纤维直径、横截面积、密度、肌内膜和肌束膜厚度等组织学指标。研究结果发现,从出壳的0周龄到4周龄,鸽胸肌纤维发育较快,肌纤维直径、肌纤维横截面积、肌内膜和肌束膜厚度都随着周龄增加而增大,肌纤维密度随着周龄的增大而不断下降。肌纤维密度和肌纤维直径、横截面积等都呈极显著负相关。4、构建了鸽胚胎成纤维细胞系,利用慢病毒介导的RNAi技术干扰鸽FABP1、FABP2和FABP3基因。研究结果发现干扰FABP1、FABP2和FABP3基因后,成纤维细胞的增殖速度出现了不同程度的下降。在干扰FABP1基因后,细胞内凋亡基因FAS基因上调了 3.1倍,Caspase-3基因上调了 2.2倍;在干扰FABP2基因后,FAS基因上调了 1.95倍,Caspase-3基因上调了 1.82倍;在干扰FABP3基因后,FAS基因上调了 5.64倍,Caspase-3基因上调了 4.89倍;干扰FABP1、FABP2和FABP3基因后,细胞凋亡极显著增加(P<0.01),表明FABP1、FABP2和FABP3在鸽细胞生长发育中具有重要作用。综上所述,鸽DGAT2、ADSL、FABP1和FABP3基因多态性显著影响鸽屠体和肉质性状,可作为鸽屠体性状和肉质性状的分子标记辅助选择;荧光定量PCR结果表明DGAT2、ADSL、FABP1、FABP2和FABP3在不同周龄鸽的各个组织均有不同程度的表达;组织学切片结果显示肌纤维直径、肌纤维横截面积、肌内膜和肌束膜厚度随着周龄增加而增大,且鸽肌纤维密度和肌纤维的直径、横截面积等呈极显著负相关;RNA干扰FABP1、FABP2和FABP3基因影响鸽成纤维细胞的增殖和凋亡,表明FABP1、FABP2和FABP3基因在鸽细胞生长发育过程中具有重要作用。