莲为多年生水生宿根草本植物,在全世界有着广泛的分布。同时,莲也是我国最具特色、栽培面积最大、品系资源最丰富的水生经济植物。荷叶是睡莲科莲属植物的叶,营养丰富且含有生物碱和黄酮等多种活性物质,是非常具有开发价值的天然植物资源。本研究通过对荷叶生物碱的分析以及分离纯化研究,为荷叶资源的进一步开发利用提供科学依据。主要研究结果如下:1.本研究利用阳离子固相萃取柱的定向吸附特性对样品进行净化,利用快速分离液相-飞行时间质谱提供的精确分子质量数,快速鉴定荷叶生物碱。样品采用1%盐酸超声提取,经固相萃取柱净化,再用氨水-甲醇进行洗脱,洗脱液浓缩后用甲醇定容。选用Welch Materials C18柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,在正离子模式下,经飞行时间质谱分析,分离并检测了9种生物碱。实验建立的快速分离液相-四级杆飞行时间串联质谱结合阳离子交换固相萃取柱前处理技术,可以快速准确鉴定荷叶生物碱成分。2.本研究建立了荷叶中生物碱类化合物的快速分离纯化技术。通过实验优化得到了三个荷叶生物碱分离体系,分别为:四氯化碳/氯仿/甲醇/0.1 M盐酸(1/3/3/2,V/V)常规高速逆流分离体系和石油醚/乙酸乙酯/甲醇/水(5/5/2/8,V/V)、叔丁基甲醚/甲醇/水(4/1/5,V/V)两个pH区带逆流色谱分离体系。分离得到的4个生物碱单体纯度均大于98%,且经过质谱和核磁共振对化合物进行了结构的鉴定。结果表明pH区带逆流色谱法是一种高效的分离制备荷叶生物碱的技术。3.采用超声提取-高效液相联用分析荷叶中的O-去甲荷叶碱、N-去甲荷叶碱、荷叶碱和莲碱四种主要的生物碱,为荷叶及相关产品的质量控制参考。选用Welch Materials C18色谱柱,以乙腈-水(含0.1%三乙胺)为流动相进行梯度洗脱,实现了O-去甲荷叶碱、N-去甲荷叶碱、荷叶碱和莲碱四种生物碱的同时基线分离。在0.1-50μg/mL浓度范围内,O-去甲荷叶碱(r = 0.9998)、N-去甲荷叶碱(r = 0.9999)、荷叶碱(r = 0.9998)和莲碱(r = 0.9998)具有良好的线性关系,它们的检出限分别为1.87 ng、2.22 ng、2.34 ng和1.88 ng (S/N = 3)。该方法具有良好的精密度和回收率,可用于荷叶中的生物碱的快速测定。