前言 血脑屏障（blood-brain barrier, BBB）是各种药物进入脑组织的最大障碍,脑肿瘤与血管之间也仍然存着血脑肿瘤屏障（blood-brain tumor barrier, BTB）,它阻碍化疗药物进入脑肿瘤组织。如何使BTB开放是提高化疗药进入脑肿瘤组织、提高化疗疗效的关键。近来国外的研究已发现小剂量缓激肽（Bradykinin BK）可以选择性开放血脑肿瘤屏障,它可能是通过增加脑肿瘤毛细血管内皮细胞质中的吞饮小泡的数量来实现的。但具体机制尚不清楚。初步的研究表明,钙激活性钾通道(K_Ca)可能是影响BTB开放的一个重要环节。本实验通过培养C6脑胶质瘤细胞,建立脑胶质瘤大鼠模型,经颈内动脉灌注BK、K_Ca通道激动剂NS1619和阻断剂IBTX,电镜观察毛细血管内皮细胞的变化,以及灌注BK后测定肿瘤组织K_Ca通道蛋白的含量变化和K_Ca通道在正常脑与肿瘤组织的分布情况,来探讨K_Ca通道在BTB开放中的机制。 材料与方法 1 细胞和动物 细胞采用中国医科大学细胞生物实验室冻存C6脑胶质瘤细胞,实验动物采用中国医科大学实验动物中心Wistar雌性大鼠,体重在180-220克。 2 试剂和仪器 主要试剂为抗K_Ca通道蛋白抗体、缓激肽、K_Ca通道激动剂NS1619和阻断剂IBTX、ECL试剂盒购于美国Sigma Chemical公司,10%胎牛血清、RPMI-1640培养基、辣根过氧化物酶结合的羊抗兔免疫球蛋白、生物素结合的山羊抗兔抗体、SABC法免疫组化试剂盒均购于北京中山公司。主要仪器为美国SIGMA3K18离心机,大鼠脑立体定向仪（日本光电株式会社）,瑞典LKB电泳仪,德国LEICA冰冻切片机,二氧化碳培养箱