【摘 要】
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目的:人胎盘间充质干细胞（human placental mesenchymal stem cells,PMSCs）已被证实可以保护肝缺血再灌注损伤（liver ischemia-reperfusion injury）,但如何增强其保护作用仍需要深入探讨。我们通过在PMSCs中过表达Lin28蛋白探究Lin28蛋白是否可以调控PMSCs糖代谢过程,通过门静脉注射过表达Lin28蛋白的PMSCs细胞
【基金项目】
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国家自然基金（青年）项目（No.81800580）；
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目的:人胎盘间充质干细胞（human placental mesenchymal stem cells,PMSCs）已被证实可以保护肝缺血再灌注损伤（liver ischemia-reperfusion injury）,但如何增强其保护作用仍需要深入探讨。我们通过在PMSCs中过表达Lin28蛋白探究Lin28蛋白是否可以调控PMSCs糖代谢过程,通过门静脉注射过表达Lin28蛋白的PMSCs细胞探究Lin28蛋白能否增强PMSCs对LIRI的保护作用,并进一步阐明内在分子机制。方法:（1）采用western blot检测缺氧条件下PMSCs中Lin28的表达。（2）利用慢病毒构建过表达Lin28的PMSCs。（3）用分光光度计检测PMSCs和过表达Lin28蛋白的PMSCs在常氧和缺氧条件下乳酸、细胞内葡萄糖、ATP及NADP+/NADPH的含量并用ECAR检测葡萄糖代谢水平和能力,探究Lin28对PMSCs糖代谢过程的影响。（4）使用western blot和实时荧光定量PCR检测葡萄糖代谢相关蛋白的表达,探究Lin28影响糖代谢主要通过哪种糖代谢相关蛋白。（5）检测micro RNA Let-7家族-PI3K-AKT通路相关蛋白及RNA的表达水平,判断Lin28影响糖代谢是否通过PI3K-AKT通路。（6）使用AKT抑制剂来验证Lin28与PI3K-AKT通路的关系。（7）将AML12细胞与PMSCs或过表达Lin28蛋白的PMSCs共培养,用流式检测AML12细胞在缺氧后的凋亡比率,以了解过表达Lin28蛋白是否能增强PMSCs保护肝细胞免受缺氧复氧损伤。（8）使用C57BL/6J小鼠建立小鼠部分肝缺血再灌注模型。将PMSCs和过表达Lin28的PMSCs注入模型小鼠门静脉。随后,在体内分析血清转氨酶水平,采用组织病理学方法评估肝损伤的程度。来探究过表达Lin28是否可以增强PMSCs保护细胞免受肝缺血再灌注损伤诱导的肝损伤、炎症和凋亡。结果:（1）缺氧条件下,PMSCs中Lin28蛋白高表达（p＜0.05）。（2）过表达Lin28慢病毒在PMSCs中的转染效率为76.36%。（3）Lin28蛋白对缺氧诱导的PMSCs增殖损伤具有保护作用（p＜0.05）。同时Lin28蛋白增加了PMSCs的糖酵解能力,导致这些细胞在缺氧条件下产生更多的能量（p＜0.05）。（4）Lin28蛋白主要通过上调乳酸脱氢酶A（LDHA）的表达增强PMSCs的糖酵解能力（p＜0.05）。（5）过表达Lin28与缺氧均能激活PI3K-AKT信号通路从而上调LDHA的表达（p＜0.05）。而且过表达Lin28是通过降低micro RNA Let-7家族来激活PI3K-AKT信号通路的（p＜0.05）。（6）使用AKT的抑制明显减弱了Lin28的作用,包括LDHA的表达上调及PMSCs的糖酵解能力（p＜0.05）,但不影响Lin28蛋白的水平（p＜0.05）。（7）过表达Lin28蛋白能增强PMSCs保护肝细胞免受缺氧复氧损伤（p＜0.05）。（8）过表达Lin28可以保护细胞免受肝缺血再灌注损伤诱导的肝损伤、炎症和凋亡（p＞0.05）。结论:（1）Lin28蛋白能促进PMSCs糖酵解从而增强其在缺氧情况下的存活。（2）Lin28通过激活PI3K-AKT通路上调LDHA表达促进PMSCs的糖酵解。（3）过表达Lin28能在体内体外促进PMSCs对肝缺血再灌注损伤的保护作用。
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