【摘 要】
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大鲵即中国大鲵、娃娃鱼,是一种古老的两栖爬行动物,体型巨大,同时也是我国宝贵的生物资源之一。上世纪,由于过度的捕捞、自然环境恶化、栖息地破坏、野生物种的繁殖和生长缓慢的原因,野生大鲵过去的几十年中一直面临着灭绝的威胁。近二十年来,随着人工育种和人工授精的技术突破与进步成熟,人工培育的大鲵数量迅速增加,培育出子二代,甚至子三代的大鲵,而一些人工养殖的大鲵放养到自然环境中,野生的大鲵得到恢复。大鲵有独
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大鲵即中国大鲵、娃娃鱼,是一种古老的两栖爬行动物,体型巨大,同时也是我国宝贵的生物资源之一。上世纪,由于过度的捕捞、自然环境恶化、栖息地破坏、野生物种的繁殖和生长缓慢的原因,野生大鲵过去的几十年中一直面临着灭绝的威胁。近二十年来,随着人工育种和人工授精的技术突破与进步成熟,人工培育的大鲵数量迅速增加,培育出子二代,甚至子三代的大鲵,而一些人工养殖的大鲵放养到自然环境中,野生的大鲵得到恢复。大鲵有独特的营养和药用价值,在食品和医药行业有特殊的应用价值。国内外研究学者对于大鲵皮、肉、骨中提取多种不同的生物活性物质,有着抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、治疗烧伤和抗菌等多种生物活性功能。而大鲵体表所分泌的黏液常在加工过程中丢弃,目前有众多学者从生物黏液中提取活性物质,而大鲵黏液同样也是提取糖蛋白的来源之一。本研究主要围绕大鲵黏液成分组成、糖蛋白提取纯化工艺以及结构分析三方面开展相关实验,所得主要结果如下:1.新鲜大鲵黏液呈现白色略带黄的不透明胶体状,粘稠度高,具有类似胡椒的特殊气味。其水分含量较高,约占整体黏液的77%（数据未写于文章内）,本文选择大鲵黏液冻干粉的方式对其进行研究。大鲵黏液冻干粉中主要由蛋白组成,占整体干基的89.285%±0.14,对其氨基酸分析研究发现,除色氨酸因水解,胱氨酸低于检测限未检出以外,测得16种氨基酸组分,其中组氨酸（His）含量最高,达10.23±0.07%,缬氨酸（Val）含量最少,达1.06±0.04%。蛋白质评价中,EAA/TAA和EAA/NEAA评分分别为36.5%和74.77%。其中必需氨基酸占整体氨基酸的31%;药用氨基酸占整体氨基酸的47.52%,由此得出大鲵黏液有巨大的开发利用潜力。其总糖、粗脂肪、灰分含量分别为7.295±0.31%、0.96±0.09%、2.46±0.29,占大鲵黏液冻干粉少数。2.采用碱提醇沉法对大鲵黏液糖蛋白进行提取。首先采用单因素实验选择最佳提取实验方案条件,得出最佳提取温度为:50℃;最佳提取时间:5 h;最佳提取液浓度为:0.3 mol/L;最佳料液比为:1:30。最佳提取工艺条件由单因素实验得出,基于单因素实验,选择进行四因素三水平的Box-Behnken实验,并进行响应面的工艺优化。经过回归分析,当在温度为51.492℃,料液比为1:30.513,提取时间为5.188 h,提取液浓度为0.319 mol/L时,得到最大提取率为5.155%,根据实际实验操作情况,取温度为51℃,料液比为1:30.5,提取时间5.2 h,提取液浓度为0.32mol/L为提取条件,进行验证实验。通过三次平行验证实验得知,大鲵黏液糖蛋白的提取率最高为5.22±0.71%,证明响应面模型优化有具有可行性,能够较好地模拟大鲵黏液糖蛋白提取过程以及预测提取率。3.采用DEAE-52阴离子交换柱层析和Sephadex G-100柱层析的方式对提取的粗糖蛋白进行纯化操作,经透析,冻干等操作,结合紫外全波长图谱,凝胶洗脱图谱分析,得到最终的糖蛋白纯品MGP。宏观上呈现出棉絮状的白色粉末,通过SEM观察微观条件下,观察表面粗糙有多孔的一种结构。对MGP进行理化性质研究,结果证明MGP蛋白含量为81.25±0.27,总糖含量12.69±0.36,其纯度达到90%以上,为纯品。MGP种含有多种药用氨基酸,具有较大的开发潜力。根据FTIR、β消除反应、~1H-NMR实验结果得出。MGP种含有O-糖肽键;存在酰胺键结构,吡喃糖环结构以及β-糖苷键,含有87%β-折叠、8%无规则卷曲、3%α-螺旋、2%β-转角结构。对MGP进行抗氧化实验,结果证明MGP对于DPPH、羟基自由基、超氧阴离子自由基具有一定的清除作用,呈现剂量相关性。但总体抗氧化性弱于Vc。
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