【摘 要】
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研究目的:研究苦豆碱对人胰腺癌细胞生物学特性的影响及其潜在的机制以及苦豆碱是否能增强吉西他滨对胰腺癌细胞的抑制作用。实验方法:苦豆碱干预人胰腺癌细胞后,利用CCK-8实验,平板克隆实验与Ed U实验来检测细胞增殖活力,流式细胞术、TUNEL实验用来检测细胞凋亡情况;细胞的迁移与侵袭能力用划痕实验与Transwell实验来评估;Western blot实验用以检测增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白的表达
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研究目的:研究苦豆碱对人胰腺癌细胞生物学特性的影响及其潜在的机制以及苦豆碱是否能增强吉西他滨对胰腺癌细胞的抑制作用。实验方法:苦豆碱干预人胰腺癌细胞后,利用CCK-8实验,平板克隆实验与Ed U实验来检测细胞增殖活力,流式细胞术、TUNEL实验用来检测细胞凋亡情况;细胞的迁移与侵袭能力用划痕实验与Transwell实验来评估;Western blot实验用以检测增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白的表达。然后将经与不经最佳作用浓度的苦豆碱处理的SW1990细胞行转录组测序,并将测序结果行GO与KEGG富集分析。Western blot实验检测人胰腺癌细胞经不同浓度苦豆碱作用后蛋白AKT,p-AKT,p-IκB,pNF-κB的表达情况。然后构建AKT1沉默稳转细胞系与AKT1过表达稳转细胞系,检测经或者不经苦豆碱作用,相关细胞中BAX,BCL-2,caspase3剪切体,PARP剪切体,p-IκB,p-NF-κB的表达情况;CCK-8实验,平板克隆实验检测各组细胞增殖能力,细胞凋亡情况以流式细胞术评估。吉西他滨单药或者联合苦豆碱作用于人胰腺癌细胞后,CCK-8实验,平板克隆实验用以检测细胞增殖活力,使用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Westren blot检测相关蛋白AKT,p-AKT,p-IκB,p-NF-κB,BAX,BCL-2,caspase3剪切体,PARP剪切体表达情况。皮下异种移植瘤实验检测苦豆碱与吉西他滨在体内对胰腺癌细胞的作用效果,并对皮下瘤进行H＆E染色,免疫组化实验。实验结果:苦豆碱可以抑制人胰腺癌细胞（PANC-1,SW1990）增殖能力,且具有时间,浓度依赖效应;且可以抑制细胞克隆形成,并可以促进细胞凋亡。同时,苦豆碱可以抑制人胰腺癌细胞的迁移,侵袭能力。Western blot结果显示经过苦豆碱作用后,在凋亡相关蛋白方面,caspase 3剪切体,PARP剪切体,BAX表达增加,BCL-2表达减少。在迁移相关蛋白方面,E-cadherin表达增加,N-cadherin表达减少。且经过苦豆碱作用后,人胰腺癌细胞中p-AKT,p-IκB,p-NF-κB表达减少。在AKT1沉默稳转细胞系中,细胞增殖能力减弱,凋亡增多,经苦豆碱作用后,增殖能力进一步减弱,凋亡进一步增多,p-IκB,p-NF-κB,BCL-2,BAX,caspase3剪切体,PARP剪切体的表达具有与之相同趋势。在AKT1过表达细胞系中,细胞增殖能力增强,凋亡减少,苦豆碱的抑制细胞增殖能力,促凋亡能力被减弱,而p-IκB,p-NF-κB,BCL-2,BAX,caspase3剪切体,PARP剪切体的表达具有与之有相同的趋势。吉西他滨抑制人胰腺癌细胞增殖,具有浓度和时间依赖效应。在体外实验中,苦豆碱与吉西他滨联合作用可以抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,降低BCL-2的表达,增加BAX,caspase3剪切体,PARP剪切体的表达,抑制AKT,IκB,NF-κB的磷酸化。在体内实验中,联合用药组的瘤体体积,重量明显小于其他各组。免疫组化结果显示联合用药组Ki-67阳性细胞数目少于其他各组。结论:苦豆碱通过抑制AKT/NF-κB信号通路发挥抗胰腺癌作用,且增强了吉西他滨对胰腺癌细胞的抑制作用。
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