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甲型流感病毒(Influenza A virus)一直是引起全球范围内人类高发病率和高死亡率的一个重要病原,而抗流感药物耐药性的增强又加重了治疗甲型流感病毒感染的压力。因此,加快研发新型抗流感药物已经迫在眉睫。本试验以A549细胞系和BABL/c小鼠作为细胞模型和动物模型,分别在细胞水平和动物水平探究L435-3对甲型流感病毒复制的影响。首先用血凝素凝集试验检测提取自真菌代谢产物的小分子化合物对已感染流感病毒的A549细胞的血凝效价,从而筛选和确定这些化合物对流感病毒复制的影响。最终筛选发现低浓度的L435-3即可抑制流感病毒的复制,因此试验选用L435-3作为本试验的进一步研究对象。在细胞水平上,用L435-3分别处理已感染甲型流感病毒A/WSN/33(H1N1)和A/PR/8/34(H1N1)的A549细胞,作用不同时间后通过血凝素凝集试验、空斑试验和蛋白免疫试验等试验技术检测L435-3对流感病毒复制的影响。在动物水平上,用L435-3分别处理已感染甲型流感病毒A/WSN/33(H 1N1)和 A/PR/8/34(H1N1)的BABL/c小鼠。观察L435-3对流感病毒感染后小鼠的存活时间、体重变化和器官病变等的影响,分析L435-3对流感病毒复制的影响。用空斑试验和Western blot试验分别检测L435-3对小鼠肺脏中流感病毒滴度和流感病毒蛋白表达量的影响。通过基因表达谱芯片,筛选L435-3处理后感染病毒的细胞中基因表达发生明显变化的宿主因子,再通过RT-PCR和qRT-PCR试验验证结果。最后通过免疫组织化学试验、血常规检测小鼠肺脏中SIgA阳性表达量和小鼠外周血白细胞数目。试验结果如下:(1)L435-3处理感染流感病毒的细胞后,细胞中的病毒滴度降低,NP和HA蛋白表达量减少。(2)L435-3处理感染流感病毒的BABL/c小鼠后,小鼠的生存时间延长,体重下降减缓,肺脏、脾脏和胸腺的病变程度降低;肺脏中的病毒滴度降低,NP和HA蛋白表达量减少。(3)L435-3处理感染流感病毒的细胞后,Ⅲ型干扰素和几个关键的干扰素刺激基因的表达量有着明显的升高,同时我们在动物水平上验证了这一结果。(4)L435-3处理感染流感病毒的BABL/c小鼠后,小鼠肺脏中的SIgA的阳性表达量明显增加,小鼠外周血中白细胞数目增加。因此本研究发现的一种新型的小分子化合物为蛇孢菌素A的衍生物——3-脱水-6-羟基-蛇孢菌素A(命名为L435-3)在细胞水平和动物水平上都显示出了很强的抗甲型流感病毒复制的作用。