荧光标记免疫层析试纸条的研制

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本论文选择沙丁胺醇作为目标检测物,选择量子点和上转换荧光纳米颗粒作为标记物,研究建立了两种荧光标记免疫层析试纸条分析方法,并将其应用到动物源性食品中的沙丁胺醇残留检测。  利用Protein A-Sepharose4B对沙丁胺醇多克隆抗体进行纯化,得到抗体浓度为2.77 mg mL-1的抗体。  利用活化酯法将抗体与羧基化的景子点(CdTe-COOH-PEG)偶联,量子点∶抗体∶1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)最佳的反应比为1∶10∶3000(摩尔比),利用尺寸排阻柱对反应后的偶联物进行纯化,去除未反应的量子点和抗体,得到纯净的抗体量子点复合物。最优反应液pH值为8.3、连接时间为3h、样品稀释液为磷酸缓冲液(PB)、抗体量子点复合物的添加量为2μL、工作液的添加量为10μL、二抗及包被原的稀释倍数分别为100倍和18倍、选择HF135s型号的NC膜、样品垫采用0.5% BSA处理,在最优条件下组装试纸条,利用湿法加样,其方法检出限为2.0μg L1。选择猪肉、牛肉、羊肉、猪肝、猪肾和鸡肉六种动物源性食品样品,确定食品样品前处理方法,食品样品检出限为10μg kg-1。  利用水热法合成了疏水性、粒径均匀的上转换材料NaYF4∶Er3+,Yb3+(OA-UCNPs),利用聚丙烯酸(PAA)通过配体交换途径在高温下对OA-UCNPs进行了表面羧基修饰,形成了水溶性的PAA-UCNPs。利用活化酯方法进行抗体与水溶性上转换材料的偶联。连接材料的最佳抗体量为0.5 mg/5 mg(抗体材料质量比)、二抗和包被原的稀释倍数分别为10倍和18倍、抗体材料复合物的添加量为10μL、样品稀释液为磷酸缓冲液、工作液的添加量为10μL。在最优条件下组装试纸条,利用湿法加样,其方法检出限为5.0μg L-1。选择猪肉、牛肉、羊肉、猪肝和猪肾五种动物源性食品样品,确定食品样品前处理方法,食品样品检出限为25μg kg-1。  本文所建立的两种检测兽药沙丁胺醇荧光标记免疫层析试纸条分析方法具有灵敏度高、特异性好、背景干扰小、检测时间短、结果判断容易等优点,适用于动物源性食品中沙丁胺醇的残留检测。
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