【摘 要】
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目的:利用豚鼠构建糖尿病膀胱病变（Diabetic Cystopathy,DCP）模型,研究经尿道灌注Cx43基因重组慢病毒药物的方式,观察受损膀胱逼尿肌细胞缝隙连接蛋白43（Connexin43,Cx43）及m RNA表达水平,为进一步研究糖尿病膀胱病变收缩功能改变奠定基础。方法:选取80只鼠龄及体重相近健康的荷兰级豚鼠,适应性喂养1周,利用随机化分组原则从80只豚鼠中挑选其中15只常规饲养,设
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目的:利用豚鼠构建糖尿病膀胱病变（Diabetic Cystopathy,DCP）模型,研究经尿道灌注Cx43基因重组慢病毒药物的方式,观察受损膀胱逼尿肌细胞缝隙连接蛋白43（Connexin43,Cx43）及m RNA表达水平,为进一步研究糖尿病膀胱病变收缩功能改变奠定基础。方法:选取80只鼠龄及体重相近健康的荷兰级豚鼠,适应性喂养1周,利用随机化分组原则从80只豚鼠中挑选其中15只常规饲养,设为正常组;剩余65只设为DCP组,给予高糖高脂饲养4周,禁食12 h,立即行糖尿病豚鼠诱导,以1%链脲佐菌素200 mg/kg腹腔注射,饲养方案继续给予高糖高脂饮食;使用血糖仪从耳廓最外周静脉测量血糖,糖尿病豚鼠模型诱导成功以随机血糖连续4周≥16.7 mmol/L为标准进行筛选,余15只豚鼠正常饲养。诱导成功的动物模型及正常豚鼠继续饲养至10周后,排除不符合糖尿病诱导的豚鼠模型;并于第10周行尿动力学检测筛选出符合DCP豚鼠模型,将筛选出符合DCP模型的豚鼠共37只,随机挑选36只作为实验对象,依据随机分组原则分为三组:实验组（n=12）、对照组（n=12）、空白组（n=12）;实验组经尿道灌注0.2 m L Cx43基因重组慢病毒,对照组经尿道灌注0.2 m L空载基因重组慢病毒,空白组经尿道灌注0.2 m L磷酸缓冲盐溶液（Phosphate Buffered Saline,PBS）。各组在尿道灌注成功后的第2天、第7天、第14天、第28天这4个时间节点分别处死3只豚鼠,分别采用q RT-PCR实验和Western-blot实验检测豚鼠膀胱Cx43 m RNA和蛋白的表达水平,通过免疫组织化学染色法观察Cx43蛋白在三组膀胱组织中表达及分布。结果:（1）37只糖尿病膀胱病变豚鼠模型诱导成功。糖尿病膀胱病变豚鼠模型逼尿肌压显著低于正常组（P＜0.05）,残余尿、最大膀胱容量、膀胱顺应性均大于正常组,差异有显著性意义（P＜0.05）（2）经尿道灌注Cx43基因重组慢病毒后,实验组较对照组及空白组的Cx43m RNA和蛋白表达水平均明显升高（P＜0.05）,且基因重组慢病毒在转染后第14天Cx43 m RNA和蛋白表达最高,对照组及空白组Cx43m RNA和蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:经尿道灌注Cx43基因可以稳定表达于膀胱组织中,并能上调Cx43 m RNA及蛋白表达,可能有利于改善受损的糖尿病膀胱逼尿肌细胞的功能。
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