VEGF反义脱氧寡核苷酸抑制胆囊癌生长及血管生成的实验研究

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原发性胆囊癌占中国胆道肿瘤发病的第一位,其发病隐匿,早期诊断困难,恶性程度高,根治性手术切除率低,对化疗和放疗均不敏感,多年来疗效未能明显改善.因而,寻找与其预后密切相关的指标并采取针对性治疗显得十分重要.但是目前与胆囊癌相关的基因治疗罕见文献报道,抗血管生成的生物治疗尚未见报道.我们前期研究已经发现原发性胆囊癌病人预后差,与其VEGF分泌增多引起的微血管生成旺盛有关.为此,设计了针对VEGF的反义基因抗血管生成治疗胆囊癌的研究,分析其价值和机理.实验首先鉴定胆囊癌细胞系GBC-SD的VEGF表达,然后在体外培养的胆囊癌细胞和裸鼠种植瘤中应用硫代修饰的VEGF反义脱氧寡核苷酸,检测在体外对胆囊癌细胞自身和人血管内皮细胞(ECV304)、人外周血单个核细胞(PBMC)等生长的影响,以及在体内对肿瘤生长速度、肿瘤内微血管密度的影响.结果如下.通过对胆囊癌细胞原位杂交和免疫组化检测,以及细胞培养液中VEGF的ELISA检测,证明了GBC-SD细胞的VEGF基因从mRNA到蛋白质水平表达呈阳性.在体外培养中,应用VEGF反义硫代寡核苷酸,显著抑制了GBC-SD细胞生长,增加了细胞凋亡,下调了VEGF表达.反义寡核苷酸能够显著减弱胆囊癌细胞培养液刺激ECV304过度生长的作用;能够显著改善胆囊癌细胞培养液降低人PBMC增殖活性的现象.在胆囊癌细胞系GBC-SD裸鼠种植瘤中,局部注射VEGF反义硫代寡核苷酸,显著抑制了肿瘤生长及VEGF表达,降低了微血管密度.
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