论文部分内容阅读
目的：研究兔股四头肌经外力重物损伤后，按摩对受损股四头肌损伤修复的分子病理、形态结构变化，受损肌组织微循环重建，肌细胞骨架相关蛋白—α-肌动蛋白（α-Actin）和结蛋白（Desmin）的表达及细胞骨架重构，骨骼肌能量代谢相关的酶活性影响，旨在探讨按摩促进骨骼肌组织损伤修复的生理、生化分子生物机制。方法：健康成年雄性新西兰大白兔33只，体重（2.0±0.5）kg，随机分为3组，正常对照组（N组，n=3）、自然恢复组（SR组，n=18）和按摩组（M组，n=12）。根据造模后观察时间的不同，SR组分为自然恢复7d组（SR7组，n=3）、自然恢复14d组（SR14组，即按摩7d对照组，n=6）和自然恢复21d组（SR21组，即按摩14d对照组，n=6）3个亚组；M组分为按摩7d组（M7组，n=6）和按摩14d组（M14组，n=6）2个亚组。N组实验动物不作任何处理，作为正常对照；SR、M组实验动物用自制打击器制备兔右后肢股四头肌损伤模型。M组于造模后第8天用RT-N2智能按摩器行按摩治疗，按摩转速3000～3100r/min，按摩时间15min，每天1次至处死取材为止；SR组不予按摩。SR、M组于伤后14d及21d，用飞利浦iu22高端彩超诊断仪对受损的股四头肌进行常规和超声微泡影像学检查。随后各组实验动物经空气栓塞法处死，取股四头肌组织样本经H&E染色观察组织病理变化；免疫组织化学染色、Western Blot检测Desmin、α-Actin表达，并观察肌纤维骨架结构；酶组织细胞化学法检测ATPase、SDH、AchE酶活性。随机选取上述各组切片各5张，镜检照相，每组切片至少记录10个视野评价损伤修复状况、计数MEP；并选取100个肌纤维，NIS-Elements BR3.2图像分析软件测定肌纤维截面积与直径；Image Pro Plus6.0图像分析软件测量并计算SDH深染I型肌纤维目标面积，SDH深染肌纤维、ATPase阳性肌纤维积分光密度（OD）。数据采用SPSS17.0统计软件进行单因素方差（One-Way ANOVA）分析，多组之间均数的两两比较采用LSD-t检验。组间差异采用t检验，P<0.05差异有统计学意义，P<0.01差别具有显著意义。结果：SR、M组实验动物均存活至实验完成。N组肌纤维形态规整，排列整齐，无结缔样组织。SR组股四头肌组织标本见明显组织坏死，多数肌肉纤维断裂、萎缩、排列紊乱；M组骨骼肌组织形态、肌肉萎缩较SR组改善，受损部位可见新生肌细胞。超声影像检测发现SR组受损股四头肌可见弥散、非均一的弱声波反射，M组比SR组见明显的功能性新生毛细血管形成、微循环的重建。酶组织化学染色显示：各时间点M组较SR组受损股四头肌乙酰胆碱酯酶活性、MEP数目和MEP平均截面积随按摩周期的增加逐步增高；SDH深染I型肌纤维百分含量、SDH酶和K~+-Na~+-ATPase酶活性都明显增加（P<0.01），并几乎接近正常股四头肌肌组织水平；免疫组织化学染色显示SR组α-Actin、Desmin染色浅，肌纤维骨架结构纹理紊乱，α-Actin、Desmin表达明显低于N组（P<0.05）；M组各时间点α-Actin、Desmin所显示的细胞骨架纹理结构逐步恢复，α-Actin、Desmin表达均较SR组增强（P<0.05），且M14d组明显高于M7d组（P<0.05）；Western blot检测证实免疫组织化学染色结果。结论：按摩可能通过促进受损股四头肌组织毛细血管的形成、微循环的重建，改善血供，增强有氧代谢相关的酶活性，改善肌细胞有氧代谢相关功能；按摩还通过上调股四头肌肌纤维细胞骨架损伤修复相关的基因表达、促进受损骨骼肌肌纤维细胞骨架重构，修复肌组织的形态，阻止肌纤维退变萎缩。