补肾活血法对高糖条件下纯化培养RGCs细胞膜稳定性的影响及相关因素研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shiguanghuai
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目的:观察补肾活血(以下简称BSHX)法对体外纯化培养的视网膜神经节细胞(RGCs)在稳定高糖及糖波动干预条件下的保护作用,并对其作用机制进行初步探讨,为BSHX法在糖尿病视网膜病变(DRP)的临床应用提供实验依据。方法:1.出生后1d的SD大鼠视网膜细胞悬液,分别经抗大鼠信号调节蛋白(CD172G)单克隆抗体、抗大鼠Thy-1.1单克隆抗体两步筛选,得到纯化的RGCs。2.将纯化的RGCs分别置于稳定高糖、糖波动及正常条件下进行培养,并以BSHX中药复方含药血清进行干预。实验分为正常对照组、正常中药干预组,稳定高糖组、稳定高糖中药干预组,糖波动组、糖波动中药干预组。3.在实验干预24h、48h及72h三个时间段分别对细胞外液进行乳酸脱氢酶(LDH)、谷氨酸(Glu)及甘氨酸(G1y)含量的测定,SPSS13.0对所得数据进行统计学分析。结果:1.糖波动条件持续48h, RGCs的细胞突起明显减少、变短,72h大多数RGCs的胞体变小呈圆形,并与突起分离;BSHX中药复方含药血清能明显减轻该种病理损害。‘2.糖波动条件持续72h,RGCs的LDH漏出量明显增加;BSHX中药含药血清能降低72h稳定高糖条件下RGCsl的LDH漏出量,以及24 h和72h糖波动条件下的LDH漏出量。3.糖波动条件持续24h,RGCs的Glu释放量明显增加;BSHX中药含药血清能降低各时段稳定高糖条件下RGCs的Glu释放量,以及24h和72h糖波动条件下的Glu释放量。4.糖波动条件持续24 h, RGCs的Gly释放明显低于正常条件及稳定高糖条件,BSHX中药含药血清对本实验中稳定高糖、糖波动及正常条件下RGCs的Gly释放量均无明显影响。结论:1.糖波动条件下RGCs的细胞形态发生明显的病理损害,BSHX中药复方含药血清能明显减轻该种病理损害,这可能是BSHX法防治DRP早期RGCs损伤的形态学基础。2.糖波动条件下RGCs的细胞膜稳定性明显下降,Olu释放量明显增加,BSHX中药含药血清能增强糖波动、高糖条件下RGCs的细胞膜稳定性.降低细胞膜通透性,增强其细胞活力,减少RGCs的Glu释放量,这可能是BSHX法防治DRP的药物干预途径之一。3.糖波动条件下RGCs的Gly释放量减少,BSHX中药血清对本实验中稳定高糖、糖波动及正常条件下RGCs的Gly释放均无明显影响,可能是BSHX法对高糖条件培养RGCs的保护作用并未通过这一途径。
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