【摘 要】
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目的:探讨线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,mtTFA)在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达及其可能的调控机制。方法:收集患儿肝脏标本并统计其临床资料;构建由甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid,GCDCA)诱导的人正常肝细胞(LO2)胆汁淤积细胞模型;HE染色检测患儿肝脏的形态学改变;CCK-8检测不同处理因
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目的:探讨线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,mtTFA)在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达及其可能的调控机制。方法:收集患儿肝脏标本并统计其临床资料;构建由甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid,GCDCA)诱导的人正常肝细胞(LO2)胆汁淤积细胞模型;HE染色检测患儿肝脏的形态学改变;CCK-8检测不同处理因素处理LO2细胞后的活力变化;Real-time PCR、qRT-PCR测定患儿肝细胞线粒体DNA(mitochondral DNA,mtDNA)拷贝数和转录水平以及mtTFA和沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulator 2 homolog 1,SIRT1)通路相关mRNA水平的变化;IHC测定mtTFA定位表达情况;Western blot测定mtTFA和SIRT1通路相关蛋白表达水平的变化。结果:统计分析临床病例资料发现,黄疸组肝功较对照组明显下降(P<0.0001);HE染色结果显示,黄疸组的肝细胞形态结构紊乱,内见胆色素沉积,并伴有胆汁淤积;CCK-8检测显示,随着GCDCA浓度的梯度增加,LO2细胞的活力逐渐下降(P<0.01),SIRT1激动剂SRT1720处理胆汁淤积组后LO2细胞活力较前升高(P<0.01);Real-timePCR、qRT-PCR结果表明,黄疸组肝细胞mtDNA拷贝数与转录水平显著下降(P<0.01),mtTFA、SIRT1和氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α,PGC-1α)mRNA水平明显降低(P<0.05);IHC染色结果表明,mtTFA主要定位在肝细胞的胞质中,在对照组中广泛表达,在实验组中表达较少;Western blot分析表明,黄疸组肝细胞、GCDCA诱导的LO2细胞中mtTFA与SIRT1蛋白水平均显著下降(P<0.01),而PGC-1α无统计学差异(P>0.05),SRT1720激动SIRT1后mtTFA蛋白的表达较前明显升高(P<0.05)。结论:mtTFA在婴儿胆汁淤积性黄疸肝细胞中的表达显著下降,SIRT1信号通路可能对mtTFA的表达具备调控作用。
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