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三七(PanaxnotoginsengF. H. Chen)属于五加科人参属植物,是“云南白药”的主要成分,常用于心脑血管等疾病的治疗。三七生长时间长,受病虫害、重金属污染等因素影响,严重制约三七药材的供应。利用植物细胞工程技术生产三七天然药用产物,对缓解三七药用资源紧张具有重要意义。建立三七细胞液体培养技术体系的步骤包括种子萌发、愈伤组织诱导、愈伤组织扩大培养和液体培养等。三七毛状根是愈伤组织与发根农杆菌互作诱导产生。三七种子经300 mg/L赤霉素浸泡12 h,去除果皮后接种于MS培养基上,黑暗条件下培养45 d后出芽率接近90%。将三七苗诱导愈伤组织,其最佳培养基为MS+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.5 mg/L)。培养温度宜选为25±1℃.而在愈伤组织的扩大培养过程中,当蔗糖浓度为 30 g/L,激素组合为 2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.2 mg/L)+KT(0.2 mg/L)时,愈伤组织的增殖倍数最大。三七细胞液体培养的最佳培养基为MS+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.2 mg/L)+KT(0.2 mg/L)+NAA(0.6mg/L),蔗糖浓度为30g/L,细胞的接种量为40g/L时,三七细胞的增殖倍数最大,而且细胞生长旺盛,皂苷总的积累量达到最高。发根农杆菌菌液浓度OD600值在0.7时,侵染带有外植体的三七愈伤组织20 min,然后于MS培养基中,共培养2d,转接到除菌培养基,诱导出的三七毛状根经冠瘿碱检测为Ri质粒转化的毛状根。培养于1/2MS液体培养基中的三七毛状根生长最旺盛,液体培养30 d的毛状根中皂苷含量达到13.52% (干重),明显高于相同时间内液体培养的三七细胞和固体培养的愈伤组织中的皂苷含量。通过研究可知,液体培养的三七细胞和毛状根具有较多药用成分,三七细胞和毛状根的液体培养技术地获得为工业化生产三七药用产物提供依据。