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在植物的生长发育过程中,植物激素发挥着极其重要的作用。植物激素能够调控细胞的发育、形态建成、胁迫响应以及免疫反应等过程。独脚金内酯(SLs)是近年来新确认的一种新型植物激素,SLs有多种类型,是一大类物质的总称。独脚金内酯对植物地上部的分枝有重要的调控作用,此外,也调控植物根系的构型、叶片的衰老以及植物的逆境响应等过程。SMXLs基因是水稻D53基因的同源基因,在拟南芥中一共有8个SMXL基因,分为3个亚家族,其中与D53同源性最高的是AtSMXL7基因,编码独脚金内酯信号途径的阻遏蛋白。
本研究以‘皇家嘎拉’苹果为研究对象,通过同源序列比对,找到了一个与拟南芥AtSMXL7基因高度同源的基因MdSMXL8.2,并对该基因的结构及染色体位置、蛋白结构、启动子顺式作用元件进行了分析;对其组织表达模式以及与非生物胁迫、激素响应之间的关系进行分析;通过在苹果王林愈伤组织中过表达MdSMXL8.2分析其对苹果盐抗性的影响,通过在拟南芥中过表达MdSMXL8.2分析其对盐抗性和分枝的影响。主要研究成果如下:
1、苹果MdSMXL8.2生物信息学分析
基因结构及染色体定位分析显示MdSMXL8.2基因有3个外显子2个内含子,开放阅读框(ORF)为3243bp,编码1080个氨基酸,定位于苹果第7号染色体上。此外苹果中MdSMXL8.2存在一个内含子保留型的可变剪接。蛋白保守结构域分析表明MdSMXL8.2含有两个Clp结构域。不同物种间的进化树分析表明MdSMXL8.2与拟南芥AtSMXL7同源性最高,并且MdSMXL8.2蛋白与拟南芥AtSMXL7蛋白的3D构象高度吻合。分析MdSMXL8.2的启动子,发现其含有激素应答、胁迫应答以及植物发育调控相关的多种顺式作用元件。
2、苹果MdSMXL8.2表达模式分析
组织表达分析显示MdSMXL8.2主要在茎中和叶中表达。激素响应分析表明,ABA诱导MdSMXL8.2表达,且MdSMXL8.2能够响应生长素、水杨酸以及茉莉酸甲酯。胁迫响应分析表明NaCl抑制MdSMXL8.2表达,而PEG和甘露醇诱导MdSMXL8.2表达。
3、苹果MdSMXL8.2负调控植物盐抗性
通过农杆菌侵染的方法获得稳定遗传的MdSMXL8.2过表达苹果王林愈伤组织和拟南芥。分析表明超表达MdSMXL8.2使苹果愈伤组织和拟南芥对盐胁迫更敏感,降低了其抗盐性。在盐胁迫下,转基因植物材料长势明显弱于野生型并且组织细胞受损害更严重。此外,过表达MdSMXL8.2降低了苹果愈伤组织渗透胁迫抗性。
4、苹果MdSMXL8.2调控植物分枝
蛋白体外降解实验显示,MdSMXL8.2蛋白不稳定且能够被SLs人工合成类似物rac-GR24降解。对MdSMXL8.2过表达拟南芥的分枝情况进行统计,发现过表达MdSMXL8.2能促进拟南芥的分枝,增加了拟南芥莲座叶分枝数目和主枝二级侧枝数目,但是其促进分枝的效果比较弱。
本研究以‘皇家嘎拉’苹果为研究对象,通过同源序列比对,找到了一个与拟南芥AtSMXL7基因高度同源的基因MdSMXL8.2,并对该基因的结构及染色体位置、蛋白结构、启动子顺式作用元件进行了分析;对其组织表达模式以及与非生物胁迫、激素响应之间的关系进行分析;通过在苹果王林愈伤组织中过表达MdSMXL8.2分析其对苹果盐抗性的影响,通过在拟南芥中过表达MdSMXL8.2分析其对盐抗性和分枝的影响。主要研究成果如下:
1、苹果MdSMXL8.2生物信息学分析
基因结构及染色体定位分析显示MdSMXL8.2基因有3个外显子2个内含子,开放阅读框(ORF)为3243bp,编码1080个氨基酸,定位于苹果第7号染色体上。此外苹果中MdSMXL8.2存在一个内含子保留型的可变剪接。蛋白保守结构域分析表明MdSMXL8.2含有两个Clp结构域。不同物种间的进化树分析表明MdSMXL8.2与拟南芥AtSMXL7同源性最高,并且MdSMXL8.2蛋白与拟南芥AtSMXL7蛋白的3D构象高度吻合。分析MdSMXL8.2的启动子,发现其含有激素应答、胁迫应答以及植物发育调控相关的多种顺式作用元件。
2、苹果MdSMXL8.2表达模式分析
组织表达分析显示MdSMXL8.2主要在茎中和叶中表达。激素响应分析表明,ABA诱导MdSMXL8.2表达,且MdSMXL8.2能够响应生长素、水杨酸以及茉莉酸甲酯。胁迫响应分析表明NaCl抑制MdSMXL8.2表达,而PEG和甘露醇诱导MdSMXL8.2表达。
3、苹果MdSMXL8.2负调控植物盐抗性
通过农杆菌侵染的方法获得稳定遗传的MdSMXL8.2过表达苹果王林愈伤组织和拟南芥。分析表明超表达MdSMXL8.2使苹果愈伤组织和拟南芥对盐胁迫更敏感,降低了其抗盐性。在盐胁迫下,转基因植物材料长势明显弱于野生型并且组织细胞受损害更严重。此外,过表达MdSMXL8.2降低了苹果愈伤组织渗透胁迫抗性。
4、苹果MdSMXL8.2调控植物分枝
蛋白体外降解实验显示,MdSMXL8.2蛋白不稳定且能够被SLs人工合成类似物rac-GR24降解。对MdSMXL8.2过表达拟南芥的分枝情况进行统计,发现过表达MdSMXL8.2能促进拟南芥的分枝,增加了拟南芥莲座叶分枝数目和主枝二级侧枝数目,但是其促进分枝的效果比较弱。