论文部分内容阅读
[目的]通过对2017年8月1日至2018年12月31日昆明医科大学第四附属医院重症监护病区(Intensive care units,ICU)新入院患者首次送检的不同部位标本分离出的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)进行耐药基因及同源性分析,了解我院ICU患者检出CRE的特性及耐药分型,探究人体不同部位CRE的同源性;收集并分析患者的临床资料及治疗情况,明确感染CRE的高风险人群,为临床及时有效去定植、抗感染提供依据。[方法]1.将2017年8月1日至2018年12月31日我院ICU新入院患者首次送检的不同部位的标本接种到自制筛查平板上进行初筛,采用VITEK2 Compact全自动系统鉴定菌株并进行药敏试验,通过mCIM联合eCIM试验进行碳青霉烯酶表型确证;2.采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测耐药基因(KPC-2、NDM-1、VIM-2、IMP、OXA-48)并对阳性产物进行测序验证,了解CRE的耐药基因型;采用随机扩增多态性技术(Randomly amplified polymorphism DNA,RAPD)进行遗传相似性聚类分析,探究筛出CRE的同源性。3.采用1:1病例-对照研究方法,将分离出CRE的患者作为实验组,将同期临床分离出碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌(carbapenem-susceptible Enterobacteriaceae,CSE)的患者作为对照组,将实验组和对照组的临床资料进行收集,采用SPSS 22.0软件对两组患者的临床资料进行单因素和多因素统计分析,了解临床感染CRE可能的危险因素。[结果]1.2017年8月1日至2018年12月31日我院ICU 1064例新入院患者首次送检标本共4359份,在自制筛查平板生长181株,经鉴定及药敏试验,得到碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌179株,其中肺炎克雷伯菌171株,大肠杆菌5株,阴沟肠杆菌2株,产酸克雷伯菌1株,这179株菌株分别来自71例不同的患者,其中有18例仅肠道筛出CRE,8例两个部位筛出CRE,35例三个部位筛出CRE,10例四个部位筛出CRE。mCIM联合eCIM试验显示,174株(97.21%)mCIM试验为阳性,表明产碳青霉烯酶,其中116株mCIM阳性、eCIM试验阴性,表明产丝氨酸碳青霉烯酶,58株mCIM、eCIM试验均为阳性,表明产金属β-内酰胺酶。2.174株检出碳青霉烯类耐药基因,耐药基因KPC-2、NDM-1、IMP、VIM-2阳性率分别为68.85%、15.30%、8.17%和7.65%,OXA-48未检出,测序结果符合度99%。RAPD结果显示,49例患者各自不同部位的CRE具有较高的同源性,将耐药基因与RAPD结果结合,49例患者各自不同部位的CRE耐药基因相同,RAPD也属同一基因型,4例患者各自不同部位标本CRE的耐药基因不相同,RAPD显示其他标本与粪便标本的CRE不属同一基因型,而与住院时间接近的其他患者筛出的CRE具有亲缘性。3.将分离出CRE的患者列为实验组,将同期分离出CSE的患者列为对照组,回顾性分析两组患者临床资料,单因素分析显示:(?)3种基础疾病、多器官功能衰竭、碳青霉烯类抗生素、3/4代头孢菌素、氨基糖苷类抗生素、万古霉素、抗真菌药的使用以及年龄>65岁、携带其他细菌、携带其他多重耐药细菌、侵入性操作p<0.05,可能是患者感染CRE的危险因素;采用二分类非条件Logistic回归,进行多因素分析,结果显示:多器官功能衰竭、碳青霉烯类抗生素的使用、侵入性操作p<0.05可能是感染CRE的独立危险因素。[结论]1.碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem-Resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)是引起CRE感染的主要病原菌,为医院感染防控的关键致病菌。药敏结果显示细菌多重耐药情况严重,可选择治疗药物种类极其有限,应将病情与药敏报告密切结合起来,制定合理的抗生素治疗方案。表型检测显示,我院ICU的CRE对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制是产碳青霉烯酶,且以产丝氨酸碳青霉烯酶常见。2.结合耐药基因检测及RAPD分型结果,大部分患者各自不同部位CRE具有高度同源性,临床有必要对CRE进行主动筛查,对CRE定植/感染者实行早发现、早干预、早治疗;少部分患者筛出CRE与其他患者CRE具有亲缘性,应对CRE定植/感染者及时采取隔离预防措施,做好周围环境卫生。3.药物治疗中,碳青霉烯类、3/4代头孢菌素、氨基糖苷类、万古霉素、抗真菌药的使用可能是CRE感染的危险因素;其他临床指标中,基础疾病(?)3种、年龄>65岁、携带其他细菌、携带其他多重耐药细菌、侵入性操作可能是感染CRE的危险因素;多因素分析中,多器官功能衰竭、碳青霉烯类抗生素使用和侵入性操作可能是感染CRE的独立危险因素,在临床诊治过程中应对高风险患者进行CRE主动筛查,及时采取防控措施,减少院内感染的发生。