论文部分内容阅读
以麻疯树(Jatropha curcas L.)成熟胚乳为外植体进行愈伤组织的诱导，测试0.4 mg/L的分裂素(BAP、KT与TDZ)与2.0 mg/L的生长素(IAA、IBA、NAA与2,4-D)搭配组合的诱导效果。在胚乳愈伤组织的诱导过程中，出现了细菌和真菌的污染。为解决污染问题，采用10％(v/v)NaCl0、0.1％(w/v)HgCl<,2>与70％酒精搭配分不同处理时间分别进行消毒灭菌。在本试验所采取的灭菌方式中，用70％酒精处理30s，然后用10％NaCIO处理25rain，灭菌效果最佳，同时对胚乳外植体的生长影响最小。可见，选择适宜的消毒剂(种类、浓度)和消毒(处理)时间对胚乳外植体的接种成功具有至关重要的作用。在消除了微生物的污染的同时，也获得了较为理想的麻疯树胚乳愈伤组织，并动态观察其类型、形态特征、增殖速率和形态发生能力，为麻疯树胚乳植株再生及愈伤组织和细胞培养生产药用成分奠定基础。结果表明，对胚乳愈伤诱导效果而言，2.0mg/L的2,4-D效果最好，NAA的效果次之，IBA又次之，IAA的效果最差。BAP和KT诱导效果差异不显著，TDZ的添加可促进愈伤组织的诱导。胚乳愈伤组织在附加0.4mg/L BAP、2.0 mg/L 2,4-D、0.5mg/L GA<,3>和1000 mg/L酵母提取物(YE)的MS培养基上培养4wk，愈伤组织出现淡黄色(1wk)→黄色(2wk)→黄绿色(3wk)→绿色(4wk)这样一种颜色变化过程。
将转为绿色的胚乳愈伤组织转接到附加1.0mg/L TDZ、2.0mg/L IAA及1000mg/LCH(酪蛋白水解物)的MS培养基上生长10wk后，从胚乳愈伤组织上分化出芽。此后，转入不定芽增殖阶段，在分化增殖培养基(培养基中LAA的浓度降至1.0mg/L，同时蔗糖的浓度降至2％)上，增殖获得了较多的不定芽。同时，发现胚乳愈伤组织在这种分化培养基上分化能力可持续半年以上，而仍具有分化不定芽的潜能。在胚乳愈伤组织分化不定芽的同时，将愈伤组织转接到生根培养基上，在附加0.5mg/LNAA的1/2MS培养基上，分化继代11wk后，从胚乳愈伤组织上分化出了不定根。为缩减生根的时间，采用附加0.5mg/L IBA和0.05mg/L NAA的1/2MS培养基，在该培养基上分化了两周，也从胚乳愈伤组织上生了根。为了使所分化的茎芽伸长，考虑在培养基中添加GA<,3>。为促进生根，考虑添加生根粉、PEG6000以及活性炭，然而，均未取得较好的效果。反复观察测试这些种类的培养基组成后，使用添加BAP或KT，同时，考虑加入IAA及GA<,3>进行测试，以获得较理想的不定芽增殖培养基配方。不定芽在附加0.5mg/L BAP和1.0mg/L GA<,3>的MS培养基上，茎芽伸长达到3cm。不定芽增殖、伸长后，将不定芽转入胚乳愈伤组织生根培养基中，重点测试在附加0.5mg/LNAA的1/2MS培养基上形成完整植株的潜能。在此培养基上，不定芽生长4～5wk后，从不定芽基部所诱导出的愈伤组织上看到了根的分化，然而，进一步观察时，所分化出的根很快萎缩变短。由于分化根的频率极低，这为根尖细胞染色体分析和三倍体鉴定工作带来诸多不便。此后，考虑从分化的幼芽来进行三倍体的鉴定工作。此方面的工作，目前尚在进一步研究之中。