论文部分内容阅读
尿路感染是一种常见病、多发病，大肠埃希菌为其主要致病菌，导致上行性尿路感染的大肠埃希菌大多具有P菌毛，称为致肾盂肾炎大肠埃希菌(UPEC)。编码P菌毛的粘附基因群(pap)位于UPEC的染色体上，由11个基因组成，其中papA编码P菌毛的主要菌毛结构亚单位，papG编码P菌毛尖端与尿道上皮细胞表面受体Gal-Gal结合的真正粘附素。近年来，UPEC papA和papG因在P菌毛组成和粘附致病中的重要作用而成为研究的焦点，尤其对papA和papG的基因分型研究在UPEC的流行病学、致病机理、遗传变异和免疫防治研究中的作用在国外越来越引起人们的关注，国内尚处于空白。 首先，本研究建立了UPEC papC PCR的方法，在其扩增片段内设计了PstⅠ内切酶位点，可用于PCR产物的鉴定，提高该方法的特异性。采用上述方法对国内分离的147株尿源性大肠埃希菌进行检测，UPEC菌株检出率为31.98％(47／147株)。与血凝试验相比较，两种方法检测结果无明显差异(P＞0.05)。继而采用多重PCR方法对45株UPEC菌株分别进行了papA和papG的基因分型，探讨国内UPEC菌株的papA和papG的基因组合形式。结果显示，45株UPEC papG的基因型均为Ⅱ型，与国外报道显著不同。其中44株(97.8％)papA基因分型结果阳性，1株(2.2％)papA结果阴性，预示为新的papA基因型。44株UPEC papA分型结果表天津医科大学博士学位论文明，24株(54.55%)具有l个基因型，13株(29.55%)具有2个基因型，4株(9 .09%)和3株(6名2%)分别具有3个和4个基因型。单一基因型较常见的为F7一2(25.00%)、Fll(6.82%)和F16(9.09%)。受试菌株各种基因型出现的频次，优势基因型依次为:F10和F13各12株(2727%)、F7一2和Fll各11株(25.00%)、F14 10株(22.72%)和F169株(20.45%);具有2个以上基因型的组合形式与国外不同，并首次发现了4个基因型(FS+Fg+F13+F14)组合的UPEC菌株。表明国内UPEC菌株存在p即A的多态性。 同时，采用PCR克隆的方法对papA多重PCR不能分型的uPEc 4030株的papA和p即G基因克隆和序列分析，结果显示，papA由720个核普酸组成，编码192个氨基酸的多肤。与国外报道的10个基因型的papA核普酸序列和推导氨基酸序列同源性比较，分别为36.n一77.95%和21.11一78.34%;与p即A基因分型多重pCR引物比较，uPEC403o在各基因型下游引物相应位置序列同源性仅为10一“.67%，表明该菌株paPA确实为新基因型，并验证了p即A基因分型方法的可靠性。砷Ec4030与天津地区曾报道UPEC 132(F13型)paPA核普酸和推导氨基酸序列比较，其同源性分别为49.70%和46.18%，变异部位主要出现在可变区和Cys一Cys区;但p即G均为n型，其核昔酸和推导氨基酸序列同源性分别为98.89%和99.01%。 综上所述，国内分离UPEC菌株paPG高度保守;而p即A呈现高度多态性，并出现与国外不同的基因型，有关临床和流行病学意义值得深入研究。