樱桃生物有机肥的研制及其生物效应

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本文为给樱桃[Cerasus pseudocerasus (Lindl.) G. Don]生物有机肥料开发提供优良的菌株资源,通过保绿法和萝卜子叶增重法,结合定量检测细菌分离物产植物激素的能力,从樱桃根际土壤中筛选具有良好应用潜力的细菌分离物。利用盆栽试验验证其促生效果,获得了一株促生效果较好的细菌分离物YT3。通过进行形态学观察、生理生化测定、16S rRNA基因序列及系统发育分析将其初步鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。以草炭为对照,研究了发酵鸡粪、蚯蚓粪和菇渣作为YT3吸附载体的可行性。结果表明:鸡粪吸水率最低,有效菌体释放效率为93.08%;菇渣的吸水性最高,但其菌体释放效率仅为67.59%;菌体释放效率与载体的阳离子代换量呈极显著的负相关。随着YT3接种时间的增加,鸡粪、蚯蚓粪和草炭处理中的活菌数均有一个明显的增加过程;在接种至第30d时,三种有机物料中的最大活菌数分别为8.9×108、7.5×108和5.9×108CFU/g,分别为初始接种量的560%、326%和187%;在第180d时,有效活菌数开始小于初始接种值。随着接种时间的延长,菇渣处理的有效活菌数呈一直下降趋势。用浸提液培养苜蓿种子36h后,鸡粪、蚯蚓粪和草炭处理的种子发芽指数均在80%以上,初步认定肥料浸提液对植物无毒。鸡粪和蚯蚓粪,尤其是鸡粪是适宜的YT3吸附载体。通过单因子试验探讨了YT3的摇瓶培养条件,确定最佳培养条件为培养基温度34°C,初始pH值6.5,摇床转速180rpm,接种量10%。YT3的生长曲线符合Logistic生长回归模型,培养3-12h为菌株对数期,YT3的适宜种龄为12h;在培养至第7h时,菌株数量增长最快。通过单因素和正交试验对YT3液体发酵培养基组成进行了优化,结果认为影响YT3生长的因素顺序由强到弱为蛋白胨、乳糖、MgSO4、K2HPO4,优化后的培养基配方为(W/V):乳糖2%,蛋白胨2.00%,K2HPO40.15%,MgSO4·7H2O0.02%,CaCl20.01%。采用绿色荧光蛋白基因标记技术对YT3进行了标记,获得了标记菌YT3(G)。质粒稳定性试验表明,含gfp标记基因的质粒在YT3中可以稳定遗传,在无选择性压力下质粒丢失率很低,可用于在盆栽试验中检测YT3(G)的定殖能力。盆栽试验结果表明,在长达120d时间内YT3(G)能够稳定定殖于樱桃根际。以一年生‘吉塞拉’樱桃苗为试材,通过盆栽试验,研究了有机肥(OF)和生物有机肥(BF)对樱桃根际细菌群落结构多样性、土壤酶活性、樱桃生长及养分吸收的影响。结果表明:同对照相比,OF和BF的施用可提高根际土壤细菌群落结构的多样性及丰富度。同对照相比,OF提高了土壤脲酶、蔗糖酶活性。同OF相比,BF处理的脲酶、磷酸酶、蔗糖酶和多酚氧化酶活性显著提高。OF的施用可促进樱桃根系的生长,提高N和P的养分吸收量。同OF处理相比,BF处理根、茎和叶的生物量分别增加9.55%,9.98%和11.16%,N、P和K养分吸收量分别提高15.35%,21.06%和32.09%。由此可见,盆栽条件下,施用有机肥和生物有机肥均可有效改善樱桃根际土壤生态环境,促进樱桃生长和养分的吸收,但生物有机肥的施用效果明显优于有机肥。
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