目的：观察肾上腺髓质素(Adrenomedullin，ADM)对幼年大鼠心肌细胞(cardiacmyocyte)凋亡的影响，并探讨其可能的作用受体及其信号转导途径。 方法：1.细胞分离培养与鉴定：用酶消化法分离细胞，差速贴壁法和药物抑制成纤维样细胞纯化获得心室肌细胞为材料，用光学显微镜和免疫细胞化学的方法鉴定细胞。2.检测方法：MTT比色法测定细胞活度，双苯并咪唑(Hoechst33342)染料荧光显微镜检测和DNA末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率，免疫细胞化学方法检测细胞内蛋白激酶B(Akt)的表达。3.实验分组：根据不同的药物及药物不同浓度，实验共分五部分，第一部分：观察ADM对基础状态下的心肌细胞是否有影响。共分5组：不同浓度(10-10～10-7M)的ADM组和空白对照组。第二部分：观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是否能够诱导心肌细胞凋亡，并确定合适的诱导细胞凋亡模型的实验浓度。共分5组：不同浓度的(10-9～10-6M)AngⅡ组和空白对照组。第三部分：观察ADM对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的影响。共分6组：空白对照组，AngⅡ(10-7M)诱导凋亡对照组，不同浓度的ADM(10-10～10-7M)+AngⅡ(10-7M)组。第四部分：ADM在心肌细胞上作用的受体观察ADM对心肌细胞凋亡的影响：分别以CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37)和ADM特异性受体拮抗剂(ADM22-52)进行干预研究，共分6组：空白对照组，AngⅡ对照组，AngⅡ+ADM对照组，AngⅡ+ADM+CGRP8-37组，AngⅡ+ADM+ADM22-52组，AngⅡ+ADM+CGRP8-37+ADM22-52组。第五部分：ADM在心肌细胞受体后信号转导途径的研究：①采用cAMP抑制剂(Br-cAMP)进行干预研究，共分4组：空白对照组，AngⅡ对照组，AngⅡ+ADM对照组，Br-cAMP+AngⅡ+ADM组；②对于Akt/PKB途径研究分3组：设置空白对照组，AngⅡ对照组，AngⅡ+ADM对照组，用特异性Akt单克隆抗体对此3组进行免疫细胞化学法检测。4.数据处理：用SPSS12.0软件包；细胞活度A值数据用均数±标准差(-x±s)表示，单因素方差分析进行统计学处理，两两比较采用LSD法，P＜0.05为有统计学意义；细胞凋亡率数据处理，采用卡方检验，两两比较采用标准四格表法，检验水准为P＜0.05有统计学意义。 结果：1.培养的细胞经过光学显微镜和免疫细胞化学的方法鉴定为心肌细胞，纯度达95％以上。 2.ADM在基础状态下对心肌细胞凋亡无明显影响，ADM各浓度组(10-10～10-7M)与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 3.ADM呈浓度依赖性地抑制AngⅡ的诱导心肌细胞凋亡作用。ADM+AngⅡ各浓度组(10-10～10-7)A值明显高于AngⅡ组(P＜0.05)，细胞凋亡率随浓度的增加而降低，各浓度组之间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。10-7M浓度的ADM抑制AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的作用最为显著，与空白对照组比较无显著差异(P＞0.05)。 4.ADM在心肌细胞上作用受体的研究：在AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的情况下，CGRP8-37和ADM22-52能显著拮抗ADM对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的抑制作用，与AngⅡ+ADM对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，二拮抗剂单独作用均不能完全拮抗ADM作用，与AngⅡ组比较差异显著(P＜0.05)，二者合用也不可完全拮抗ADM作用，与AngⅡ组比较差异显著(P＜0.05)。 5.ADM在心肌细胞受体后信号转导途径的研究显示：cAMP抑制剂Br-cAMP能阻断ADM对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的抑制作用，与AngⅡ+ADM对照组比较有显著差异(P＜0.01)，与AngⅡ组比较仍有显著差异(P＜0.01)。Akt免疫细胞化学，AngⅡ+ADM组可见少量细胞阳性，说明受体后的Akt/PKB途径在一定意义上可能参与了ADM对心肌细胞凋亡的保护作用。 结论：1.ADM对基础状态下的心肌细胞无影响； 2.ADM呈浓度依赖性地抑制AngⅡ介导的心肌细胞的凋亡。 3.心肌细胞上存在着CGRP受体和ADM特异性受体两种受体，ADM可能是通过这两种受体途径参与心肌细胞凋亡保护作用，还可能存在其他受体； 4.ADM抑制心肌细胞凋亡主要机制可能是通过依赖cAMP的途径介导； 5.受体后Akt/PKA途径可能是ADM抑制细胞凋亡的通路之一。