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心肌缺血再灌注损伤是导致心肌梗死和心绞痛等心血管疾病的一种复杂的病理生理过程,虽然心肌缺血再灌注损伤的具体机制尚不十分明确,但研究发现炎症反应和中性粒细胞的聚集在再灌注损伤上发挥了重要作用。Toll样受体4(toll like receptor-4, TLR4)是介导炎症反应的重要受体,其可使核转录因子-KB(nuclear factor-KappaB, NF-κB)激活,导致炎症因子,如肿瘤坏死因子-α (tumor necrotic factor a, TNF-a)等增加。TNF-a本身具有负性肌力的作用,影响心脏的收缩功能,可降低血压,还可以增加中性粒细胞聚体,进步一加重炎症反应。此外TLR4的激活和TNF-a的释放增加还可以加重细胞凋亡的发生,因此抑制炎症反应,抑制细胞凋亡对防治心肌缺血再灌注损伤的发生具有重要的意义。霉酚酸酯(Mycophenolate mofetil,MMF)是霉酚酸(Mycophenolic Acid,MPA)的吗啉代乙酯。临床上主要用于抑制术后的排斥反应。在大鼠模型霉酚酸酯可以通过下调TLR4受体信号通路来降低炎症反应而改善肾脏缺血再灌注损伤,降低肾间质纤维化。心脏移植术后霉酚酸酯可以降低或延迟心血管损伤的发生。因此我们推测霉酚酸酯对心肌缺血再灌注损伤有一定的防治作用,本研究在大鼠缺血再灌注损伤模型,首先证实霉酚酸酯预处理有保护作用,进而从细胞凋亡的角度进一步证实霉酚酸酯对心肌缺血再灌注损伤的保护作用,最后从炎症及信号转导通路方面,对其作用机制进一步阐述,本研究将为霉酚酸酯在心血管保护领域的进一步应用提供理论依据。第一部分霉酚酸酯预处理对缺血再灌注大鼠心肌的保护作用目的：观察霉酚酸酯预处理对缺血再灌注大鼠心肌的保护作用。方法：健康成年SD雄性大鼠30只,随机分成3组：①假手术组；②模型组：左冠状动脉前降支结扎30分钟后再灌注90分钟；③霉酚酸酯组：手术前5天灌胃给予20mg/kg霉酚酸酯,一天一次。NBT染色观察心肌梗死面积；HE染色观察心肌形态学变化；ELISA法测定心肌乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)变化。结果：与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积明显增加(P<0.05),LDH、CK活性显著增加(P<0.05),HE染色观察心肌肌纤维断裂,细胞肿胀坏死,并有大量炎细胞侵润。与模型组相比,霉酚酸酯的预处理可以降低心肌梗死面积(P<0.05),降低LDH和CK活性(P<0.05),形态学也有所改善。结论：霉酚酸酯预处理对缺血再灌注心肌具有一定的保护作用。第二部分霉酚酸酯预处理对缺血再灌注心肌凋亡的影响目的：观察霉酚酸酯预处理对缺血再灌注大鼠心肌凋亡的影响。方法：采用左冠状动脉前降支结扎的方法,复制缺血再灌注损伤模型,实验分为①假手术组；②模型组：左冠状动脉前降支结扎30分钟后再灌注90分钟；③霉酚酸酯组：手术前5天灌胃给予20mg/kg霉酚酸酯,一天一次。JC-1染色观察线粒体膜电位,电泳法观察Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达水平。结果：与假手术组比较,模型组大鼠线粒体膜电位降低,心肌Bcl-2蛋白表达降低,而Bax和caspase-3表达增加。霉酚酸酯预处理可以明显抑制线粒体膜电位的降低,增加Bcl-2蛋白表达,降低Bax和caspase-3表达。结论：霉酚酸酯预处理可以减轻缺血再灌注心肌凋亡的发生。第三部分霉酚酸酯预处理对缺血再灌注心肌炎症反应及炎症信号通路的影响目的：观察霉酚酸酯预处理对缺血再灌注大鼠心肌炎症反应及炎症信号通路的影响。方法：采用左冠状动脉前降支结扎的方法,复制缺血再灌注损伤模型,实验分为①假手术组：②模型组：左冠状动脉前降支结扎30分钟后再灌注90分钟；③霉酚酸酯组：手术前5天灌胃给予20mg/kg霉酚酸酯,一天一次。免疫组化和电泳测定心肌组织TLR4表达,电泳法测定核蛋白NF-κBp65表达,酶联免疫吸附法测定血清中TNF-α, MPO含量。结果：与假手术组比较,模型组大鼠TLR4表达增加(P<0.05),核蛋白NF-κBp65表达增加(P<0.05),血清中TNF-α, MPO含量明显升高(P<0.05)。与模型组比较,霉酚酸酯的预处理可以明显抑制TLR4和NF-κBp65的增加,降低TNF-α, MPO含量。结论：霉酚酸酯的预处理可以有效抑制缺血再灌注心肌的炎症反应和炎症信号通路的激活。