Rhodanobacter sp.GS3054菌酶转化法制备人参皂苷Rd的研究

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我国是人参的故乡,人参是我国的传统名贵中药,人参以其卓越的对多种疾病的防治效果和对人体的滋补强壮作用,已久为世界上驰名中药。人参中的天然活性成分具有很高的药用价值,人参的主要生物活性成分为人参皂苷,其中人参皂苷Rd,具有促进副肾皮质荷尔蒙分泌作用和保护肾的作用,能促进T细胞增殖,提高天然杀伤细胞(NK)的活性。本论文以制备人参皂苷Rd及其酶的分离提取为主要目的。本论文主要以细菌产酶,利用酶转化法制备人参皂苷Rd。筛选了产酶的最适菌种,研究了产酶条件的优化、酶反应产物人参皂苷Rd的分离提纯和酶的分离提纯及其酶的性质。本实验采用sp.GS3054作为产酶菌种,最适诱导物为槐花,最适培养时间为3天,最适培养温度为30℃,最适培养基为2号培养基。利用DEAE-Cellulose离子交换柱对人参皂苷酶分离提纯,提纯酶液进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测其纯度,得到一条单带,分子量为62kDa。确定最适酶反应条件,三种底物浓度均为为0.1%,反应最适PH值为5.0,最适酶反应温度为30℃,研究了一些无机离子对酶反应的影响,其中钠离子、钾离子对酶反应的影响不大;铁离子对酶反应的影响较大,反应生成Rd以后继续反应生成其它人参皂苷;镁离子和钙离子对酶反应由一定的促进作用;铝离子和铜离子,当离子浓度较低时,对酶反应具有促进作用,当离子浓度较高时,它又抑制酶反应的进行。从西洋参须中提取总皂苷,在分离人参二醇类皂苷,其得率为6%;对西洋参人参二醇类皂苷样品30g进行了硅胶柱分离,得到含人参皂苷Rd皂苷9.46g,得率为32.5%,得到纯Rd4.70g,得率为15.6%;较纯Rc2.46g,得率8.2%;较纯Rb14.84g,得率为16.1%。采用结晶的方法对1g样品(硅胶柱分离后的较纯人参皂苷Rd)进行提纯,得到人参皂苷Rd 500mg,得率为50%,其纯度为98%左右。
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