【摘 要】
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从三个构建的次级基因文库中,通过鸟枪法和点膜杂交法筛选得到含有caiTABCDEF和fixAB九个基因的三个目的克隆质粒.将各个基因克隆在T7启动子下得到基因表达质粒,它们分别命名
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从三个构建的次级基因文库中,通过鸟枪法和点膜杂交法筛选得到含有caiTABCDEF和fixAB九个基因的三个目的克隆质粒.将各个基因克隆在T7启动子下得到基因表达质粒,它们分别命名为pT7-caiT、pT7-caiA、pT7-caiB、pT7-caiC、pT7-caiD、pET16b-caiE、pET11ap-caiF、pT7-fixA、pT7-fixB.在BL21（DE3）宿主菌中,经IPTG诱导后进行蛋白表达.结果除了caiC基因外,其它八个基因均获得明显的蛋白表达（30﹪以上）,其中caiABDEF基因表达产物为胞内可溶性表达.经活力测定,初步确定所表达的CaiABEF蛋白具有各自相应的活力.针对大肠杆菌中L-肉碱的代谢途径,分别构建了caiA、caiBC、caiBCA基因灭活的质粒.将酶切、回收得到的caiBC灭活片段自身环化,对宿主BL21（DE3）菌株进行同源重组实验.
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