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研究背景：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand, TRAIL, Apo-2L)是TNF超家族成员之一,通过与其特异性死亡受体(DR4, DR5)结合而激活凋亡信号转导途径,选择性诱导多种肿瘤细胞及转化细胞凋亡,而对正常细胞无杀伤作用。尽管TRAIL已被证实能杀伤白血病细胞而不影响正常宿主细胞,但某些肿瘤细胞对TRAIL诱导的凋亡有耐受性,需要其它化疗药物来促进其对TRAIL的敏感性,这严重影响TRAIL的临床应用,为治疗带来巨大挑战。因此,寻找能增强TRAIL诱导白血病细胞凋亡的药物可以提高其临床应用前景。组蛋白的乙酰化和脱乙酰化在调节基因表达方面起着重要作用,并且组蛋白脱乙酰化酶(histone deacetylases, HDACs)和组蛋白乙酰转移酶(histone acetylases, HATs)的活性与肿瘤的发生有关。组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors, HDACIs)可以抑制组蛋白脱乙酰化酶,促进组蛋白乙酰化,调节染色质结构和基因转录,表现出抗增殖、促进分化、诱导凋亡等作用。研究表明HDACIs与多种药物联合应用,可能产生协同抗肿瘤效应,成为一类新的吸引人的治疗AML、ALL及MDS等血液系统疾病的药物。Panobinostat (LBH589)是一种小分子的HDACIs,为异羟肟酸(氧肟酸)类,能阻断癌症和与癌症发生有关的多种病理通路,降低癌细胞的存活,诱导癌细胞的凋亡。有报道,LBH589能增强组蛋白H3、H4乙酰化水平和非组蛋白乙酰化水平,在白血病细胞中,能减弱信号蛋白磷酸化,以剂量依赖的形势诱导凋亡。急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)是临床常见的一类疾病,其社会危害大,伴t(8；21)阳性AML占全部AML患者的10%-15%,被认为是一种预后良好的类型,但复发和耐药仍然威胁患者长期生存,接近50%的病人复发,且其发病年龄轻,社会危害更为显著。Kasumi-1细胞是培养自人t(8；21)急性髓系白血病患者的细胞系,为研究此类白血病的良好模型,本研究旨在探讨rsTRAIL联合LBH589体外诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用,为此类患者寻找新的治疗方法。第一部分LBH589体外增强rs TRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡目的：观察rsTRAIL、LBH589在体外单独及其联合诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用。方法：采用Wright染色法观察rsTRAIL单药、LBH589单药及二者联合作用于Kasumi-1细胞后,细胞形态改变；采用WST-8(CCK-8)比色法测定rsTRAIL单药、LBH589单药及二者联合应用对Kasumi-1细胞的生长抑制作用；用流式细胞术检钡rsTRAIL单药、LBH589单药及二者联合作用于Kasumi-1细胞后细胞的凋亡率。结果：(1)rsTRAIL和LBH589在体外单用应用均可抑伟Kasumi-1细胞的生长,10nM和50nM LBH589分别与不同浓度rsTRAIL联合用药可增加对Kasumi-1细胞的生长抑制率,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。(2)rsTRAIL (10ng/mL)和LBH589(50nM)在体外单药及联合作用于Kasumi-1细胞,Annexin V阳性细胞百分率分别为(26.03±2.48)%、(24.99±4.11)%及(66.01±7.15)%,与对照组(7.34±7.15)%相比,差异显著(P<0.001)。结论：LBH589在体外具有增强rsTRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用。第二部分LBH589体外增强rs TRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡机制的研究目的：探讨rsTRAIL、LBH589在体外单独及其联合诱导Kasumi-1细胞凋亡作用的机制。方法：采用实时定量PCR法检测不同浓度LBH589作用于Kasumi-1细胞,经不同作用时间后TRAIL受体DR4、DR5、DcR1及DcR2基因水平变化；Western blot法检测rsTRAIL、LBH589单独及联合作用于Kasumi-1细胞后,DR4、caspase-3、caspase-9、Bax、Bid及Bcl-2的变化。结果：(1)实时定量PCR法检测发现LBH589可以上调死亡受体DR4的表达。(2)Western blot法检测发现LBH589单独及其联合rsTRAIL应用能上调DR4的表达,激活caspase-3、caspase-9和下调Bcl-2的表达。结论：LBH589具有增强rsTRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用,其机制与DR4上调,caspase-3、caspase-9激活,以及Bcl-2下调有关。