苜蓿(Medicage stativa L.)为一种多年生豆科牧草,是我国推广应用的主要牧草之一。目前,国内外已经将苜蓿作为一种蛋白资源开发利用。苜蓿叶蛋白提取副产品主要有残渣和棕色液,棕色液中含有的苜蓿黄酮类化合物具有抗氧化、消除自由基、抗肿瘤及雌激素样作用,具有广阔的应用前景。本课题研究苜蓿叶蛋白提取工艺对棕色液中黄酮含量的影响,以及废弃液中总黄酮的分离及初步纯化工艺,为综合开发利用工业上提取叶蛋白后的废液提供依据,从而为提高苜蓿经济价值开辟一条新的途径。1.本课题通过单因素及完全正交试验,对醇提法从苜蓿干草中提取黄酮的工艺条件进行优化,确定其最佳工艺条件为：乙醇浓度为70%、提取温度为80℃、提取料液比为1：20、提取时间为90min。同时,比较了8个苜蓿品种不同采收期品种间及品种内收获时期间总黄酮含量差异,结果显示,各品种黄酮含量均随收获期由早到晚的顺序而呈现明显的增长趋势。在4月、6月、8月和11月等4个采收期中,11月份取材的苜蓿全草总黄酮的含量达到最大值,除赛阔在6月、8月两个采收期与其11月采收期差异不显著外,其余各品种11月黄含量均显著高于其他三个采收期(p<0.05)。2.以苜蓿叶蛋白及总黄酮得率为检测指标,采用碱溶酸沉法及酸热法进行提取叶蛋白并获得棕色液。通过不完全正交试验确定了棕色液路径提取苜蓿总黄酮的最佳提取工艺。碱溶酸沉法最佳提取工艺：碱浸pH为10,酸沉pH为4.4,酸沉时间为32min,叶蛋白提取量为16.611mg/g,总黄酮收获量为0.365mg/g。酸热法最佳提取工艺：酸处理PH为5.1,热凝温度为85℃,热凝时间为9min,叶蛋白提取量为18.085mg/g,总黄酮收获量为0.384mg/g。3.通过比较三种不同型号大孔吸附树脂的吸附及解吸性能,选择AB-8型树脂纯化棕色液中的总黄酮,确定最佳工艺条件为：上样液质量浓度为0.528mg/ml,洗脱剂为70%乙醇溶液,洗脱剂用量为3BV,黄酮粗提物纯度为48.52%。