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第一部分pLenti6/V5-WISp39真核表达载体的构建、转染目的:为研究WISp39基因对白血病细胞生长增殖的影响,构建WISp39的真核表达质粒pLenti6/V5-WISp39,并转染人髓系白血病细胞系U937细胞。方法:通过基因重组和分子克隆技术构建pLenti6/V5-WISp39真核表达载体并鉴定,应用脂质体(Lipofectamine2000?)转染,将pLenti6/V5-WISp39、pLenti6/V5-LacZ(阴性对照)导入U937细胞,另一组未转染细胞作为空白对照。37℃5% CO2培养6小时后换液,孵育48h,收集各组细胞,提取RNA,Real-time PCR检测细胞中WISp39 mRNA的表达。结果:重组质粒经过PCR检测和公司测序证实构建成功,转染48小时后,RT-PCR测得实验组中WISp39 mRNA上升了(5.5±1.2)倍。结论:真核表达载体pLenti6/V5-WISp39的重组质粒构建正确,并成功转染了人髓系白血病细胞系U937细胞,为研究WISp39基因的功能提供了条件。第二部分WISp39基因对U937细胞增殖、凋亡和周期的影响目的:研究WISp39对白血病细胞U937细胞的增殖、凋亡和周期的影响。方法:将pLenti6/V5-WISp39转染U937细胞,转染后48h收集细胞悬液,用CCK-8法测定细胞增殖活性;流式细胞术(FACS)AnnexinV和PI双标,检测细胞凋亡,PI染液测定细胞周期的变化。结果:pLenti6/V5-WISp39转染48小时后,WISp39 mRNA水平明显升高,同时U937细胞的增殖明显受到抑制,抑制率为37.6%;在实验时间内,WISp39表达的升高不能明显诱导U937细胞的凋亡,实验组和对照组无显著性差异(P>0.05);但WISp39的表达使G0/G1期细胞比例增多,由对照组的(40.59±0.7)%上升到实验组的(49.79±1.1)% (P<0.05)。结论:WISp39对U937无明显的诱导凋亡作用,但通过对细胞周期的影响,使停滞在G0/G1期的细胞增多,从而抑制了U937细胞的增殖。