LA诱导下L.plantarum p-8 CLA-HY基因的转录调控机制研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wujunming123123
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共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是具有益生理功效的各种共轭十八碳二烯酸类物质的总称。研究发现,乳酸菌可将亚油酸(linoleic acid,LA)主要通过脂肪酸水合酶(Fatty acid hydratase,CLA-HY)、羟基脂肪酸脱氢酶(Hydroxy fatty acid dehydrogenase,CLA-DH)以及乙酰乙酸脱羧酶(Acetoacetate decarboxylase,CLA-DC)催化而生成CLA。另外,有些生物体中还有烯酮还原酶(Enone reductase,CLA-ER)和烯醇化酶(Enolase,Eno)参与催化。CLA-HY是CLA合成途径中的第一个催化酶,对CLA合成至关重要,但CLA-HY基因转录调控机制不清。为此,本实验以L.plantarum p-8为材料,采用多种组学、分子生物学和生物信息学的先进技术和手段,分析LA对L.plantarum p-8生长、CLA转化率和乙酰Co A含量的影响,探究LA诱导下差异表达的蛋白质,了解LA诱导下与CLA合成相关的酶和蛋白因子的转录水平差异,检测LA诱导下组蛋白乙酰化水平差异,进而初步诠释LA诱导下L.plantarum p-8中CLA-HY基因的转录调控机制。研究结果可帮助人们充分理解乳酸菌LA耐受和转化CLA的机制,并为分子改良或科学调控乳酸菌用于提高CLA转化率提供理论依据。主要结果如下:1.植物乳杆菌p-8的LA最佳诱导浓度为1 mg/m L,此浓度下LA转化成CLA异构体最多,其中c9,t11-CLA的转化率为2.89%,t10,c12-CLA转化率为2.46%,t9,t11-CLA转化率为2.69%。2.植物乳杆菌p-8在无添加LA和乙酸钠、添加1 mg/m L的LA、添加1 mg/m L的LA和20 m M乙酸钠、添加1 mg/m L的LA和40 m M乙酸钠四种情况下,乙酰辅酶A含量和组蛋白乙酰化水平依次上调,CLA合成相关的五个酶(cla-hy、cla-dh、cla-dc、cla-er、cla-eno)、转录调控因子、σ因子的基因转录水平也依次递增,CLA三种异构体的转化率也依次递增。且乙酰辅酶A与cla-hy转录水平和CLA的三种异构体合成之间均呈显著正相关。3.比较蛋白组学分析发现,添加LA组较不添加LA组上调的蛋白有30个,下调的蛋白有19个,而乙酰化酶上调与组蛋白乙酰化水平上调一致。GO分类结果表明,上调蛋白多富集在碳水化合物衍生物代谢过程中,而下调蛋白多富集在生物合成、小分子代谢、细胞脂质代谢、氧化还原、羧酸代谢、有机酸合成、含氧酸生物合成、脂肪酸代谢、机酸代谢和脂肪酸合成代谢过程。KEGG代谢通路分析结果可知,下调蛋白多富集在精氨酸合成、嘌呤代谢、生物素代谢、抗生素合成过程;上调蛋白多富集在丙氨酸代谢过程中。
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