羧甲基壳聚糖衍生物的制备及其性能研究

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羧甲基壳聚糖是一种重要的壳聚糖水溶性衍生物。因其良好的生物活性,近年来已有不少学者在较为广泛的领域内对羧甲基壳聚糖及其衍生物的制备方法,以及其在医药、环保、化妆品、食品等领域的应用前景展开了研究。本论文分别以胶原蛋白肽接枝羧甲基壳聚糖季铵盐,以硫酸软骨素和RGD肽接枝羧甲基壳聚糖。制备出的多肽接枝羧甲基壳聚糖及其衍生物的生物材料能有效促进成纤维细胞的生长及粘附,此外,胶原蛋白肽的引入还改善了羧甲基壳聚糖季铵盐的抗氧化活性,避免了由于机体表面创伤引起的自由基反应造成的进一步组织损伤,并且能够促进伤口愈合,缩短愈合时间,为开发新型创伤敷料奠定了基础。制备的硫酸软骨素接枝羧甲基壳聚糖材料能有效促进成骨细胞生长,并赋予羧甲基壳聚糖抗凝血活性,为开发新型骨科材料奠定了理论基础。本论文的主要研究内容和结果如下:(1)以羧甲基壳聚糖为原料,水溶性的3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵为季铵阳离子化试剂制备羧甲基壳聚糖季铵盐,再采用EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)为交联剂,在水相中制备羧甲基壳聚糖季铵盐-胶原蛋白肽。通过单因素实验法,得到制备羧甲基壳聚糖季铵盐-胶原蛋白肽的最优条件为:胶原蛋白肽与羧甲基壳聚糖季铵盐的质量比为6.0,反应温度为40℃,反应时间为16h。过氧化氢清除率实验结果表明,随着取代度的增大,过氧化氢清除率随之增大;然而随着浓度的增大和分子量的降低,过氧化氢清除率呈现出先增大后减小的趋势,其中最适分子量为2.23×104。成纤维细胞存活率实验结果表明,羧甲基壳聚糖季铵盐-胶原蛋白肽能有效促进成纤维细胞的生长,成纤维细胞存活率随着取代度的增大而增大;然而随着浓度的增大,成纤维细胞存活率呈现出先增大后减小的趋势;成纤维细胞粘附实验结果则表明,胶原蛋白多肽的引入改善了羧甲基壳聚糖对于成纤维细胞的粘附作用,并且成纤维细胞的粘附率随着样品取代度和浓度的增大而升高,呈明显的正相关效应。(2)以EDC和NHS为交联剂,制备羧甲基壳聚糖-硫酸软骨素。通过单因素实验法,得到制备羧甲基壳聚糖-硫酸软骨素的最优条件为:硫酸软骨素与羧甲基壳聚糖质量比为4.0:1,反应温度为35℃,反应时间为24h。抗凝血实验结果表明,APTT、PT及TT随着羧甲基壳聚糖-硫酸软骨素取代度及浓度的增大而增大,对APTT的增强最为明显,同时随着分子量的变化而变化。对成骨细胞存活率实验结果表明,羧甲基壳聚糖-硫酸软骨素能有效促进成骨细胞的增殖与生长,并且细胞存活率随着样品取代度的增大而增大,与成骨细胞增殖呈正相关;然而随着样品浓度的增大,成骨细胞的存活率先增大后减小。(3)以EDC和NHS为交联剂,制备羧甲基壳聚糖-GRGDY肽。通过单因素实验法,得到制备羧甲基壳聚糖-GRGDY肽的最优条件为:羧甲基壳聚糖与GRGDY肽质量比为10.0:1,反应温度为25℃,反应时间为48h。成纤维细胞存活率实验结果表明,羧甲基壳聚糖-GRGDY肽能有效促进成纤维细胞的生长,并且随着样品取代度和浓度的增大,成纤维细胞存活率也随之增大,与成纤维细胞增殖呈正相关的关系。成纤维细胞粘附实验结果则表明,GRGDY多肽的引入明显促进了羧甲基壳聚糖对于成纤维细胞的粘附作用,并且成纤维细胞的粘附率随着样品取代度和浓度的增大而升高,呈明显的正相关效应。
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