1.目的在中国传统医学“从脾治痹”的理论指导下,以脾气亏虚为切入点,分析和总结干燥综合征(Sjogren syndrome,SS)患者血瘀状态形成的中医学病机,并临床观察SS患者凝血参数、血瘀症状积分、症状体征积分、生活质量积分、焦虑抑郁积分、外周血细胞因子、NF-кB信号通路蛋白及相关实验室指标的变化,评价中药复方新风胶囊(Xin Feng Capsule,XFC)对其影响,探讨XFC改善SS患者血瘀状态的作用机制。2.方法2.1理论研究通过对大量古代医家有关文献的研究,分析SS血瘀状态形成与脾气亏虚的关系,总结SS血瘀状态形成的中医学病因病机,从而阐释SS血瘀状态从脾论治的中医理论依据。2.2临床研究选择2014年3月至2015年4月在安徽省中医院风湿免疫科接受治疗的干燥综合征患者66例,按照随机数字表分为新风胶囊组(治疗组)和硫酸羟氯喹组(对照组)各33例,另选经体检和免疫学检查排除自身免疫性疾病,身体健康、无明显器质性疾病者20例作为健康对照组。采用Sysmex公司CA7000全自动血凝分析仪进行测定凝血酶原时间(Prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(Activated partial thromboplastin time,APTT)、纤维蛋白原(Fibrinogen metaglobulin,FIB)、凝血酶时间(Thrombin time,TT)、D-二聚体(D-dimmer,D-D);采用ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)、白介素--4(Interleukin-4,IL-4)、核因子-кB p65(Nuclear facter-kappa B p65,NF-кB p65)、核因子-кB p50(Nuclear facter-kappa B p50,NF-кB p50)、核因子κB抑制蛋白(inhibitor of NF-кB,I?Bα);采用实时荧光定量(real time-PCR,RT-PCR)检测NF-кB p65、NF-кB p50、I?Bαm RNA表达;采用一步法荧光定量PCR测定微小RNA-155(Micro RNA-155,miR-155)含量;采用蛋白免疫印迹法(Western Blotting,WB)检测NF-кB p65、NF-кB p50蛋白表达;采用魏氏法测定红细胞沉降率(Erythrocyte Sedimentation Rate,ESR);采用日立7060型全自动生化分析仪进行测定超敏C反应蛋白(Hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP);采用问卷量表观察SS患者血瘀症状积分、症状体征积分、生活质量积分、焦虑抑郁情绪积分等;采用SPSS 17.0软件分析比较两组治疗后的疗效及凝血参数、血瘀症状积分、症状体征积分、生活质量积分、焦虑抑郁积分、外周血细胞因子、NF-кB信号通路蛋白和相关实验室指标的变化情况。3.结果3.1理论研究结果3.1.1 SS与血瘀状态关系密切SS与血瘀状态的关系密切,血瘀既可以导致燥证的发生,燥证也可以导致瘀血的形成,两者互为因果,胶结难分。3.1.2脾气亏虚是SS的发病基础SS与脾、肺、肾三脏密切相关,而其中尤以脾最为关键,因“脾主运化水谷之精”,为气血津液化生之源,又“脾主升清”“脾气散精”,主津液的输布,饮食水谷入胃,必须通过脾脏的运化及胃腑的消磨协调作用后才能化生为津液,津液生成后又赖脾气的推动“为胃行其津液”,从而将津液输布全身。同时,脾“开窍于口”,可通过足太阴脾经连舌本,散舌下,将脾精上承于口而“主涎”,从而促进唾液腺的分泌。3.1.3脾气亏虚是SS血瘀状态形成的病机关键SS血瘀状态的形成虽有因虚、因燥、因郁、因久之异,且受多种因素影响,同时也是多个脏腑共同作用的结果,但其中尤以脾为关键,脾气亏虚是SS血瘀状态形成的病机关键,脾气亏虚,化源匮乏,脉道不充,血流滞缓;脾气亏虚,运化失职,聚为痰饮,阻碍气机;脾气亏虚,统摄无权,血行乖张,溢于脉外;脾气亏虚,中焦虚寒,温煦不及,血行迟缓,最终导致血瘀状态的形成。3.2临床研究结果3.2.1 SS患者凝血参数的变化66例SS患者中,至少有一项凝血参数异常的共有47例,占受检SS患者总数的71.21%,其中参数异常率最高的为D-D(33例,50.00%),其次依次为FIB(21例,31.82%)、TT(9例,13.64%)、APTT(3例,4.55%)、PT(2例,3.03%);二项同时异常者共14例;三项同时异常者共3例;四项及五项同时异常者均为0例;与NC组比较,SS组凝血参数指标D-D、FIB明显升高(P<0.05或P<0.01)。3.2.2 SS患者外周血细胞因子、NF-кB通路蛋白、炎症指标的变化与正常组比较,SS组患者外周血细胞因子IL-4、IL-10水平明显降低;细胞因子IL-1β、TNF-α,炎症指标hs-CRP、ESR及通路蛋白NF-кB P50、NF-кB P65、I?Bα水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。3.2.3 SS患者凝血参数与各指标间相关性分析凝血参数PT与舌质积分呈负相关;凝血参数FIB与关节刺痛积分、唇色积分、舌质积分、脉象积分呈正相关;凝血参数D-D与唇色积分、舌质积分、脉象积分呈正相关(P<0.05或P<0.01)。凝血参数D-D与病程呈显著正相关(P<0.01)。凝血参数FIB与静态唾液流率呈负相关,与ESSDAI评分呈显著正相关;凝血参数D-D与ESSDAI评分呈显著正相关(P<0.05或P<0.01)。凝血参数FIB与双目干涩、心悸评分呈正相关;凝血参数D-D与口干咽燥、双目干涩、面色萎黄评分呈正相关(P<0.05或P<0.01)。凝血参数APTT与身体疼痛积分呈正相关;凝血参数FIB与焦虑量表积分呈正相关,与总体健康积分、社会功能积分呈负相关;凝血参数D-D与焦虑、抑郁量表积分呈正相关,与总体健康积分、情感职能积分呈负相关。凝血指标APTT与NF-кB P65呈负相关;FIB与TNF-α、NF-кB P50、NF-кB P65、ESR、hs-CRP呈正相关,与IL-4呈负相关;TT与TNF-α呈负相关;D-D与TNF-α、IL-1β、NF-кB P65、ESR、hs-CRP呈正相关,与IL-4、IL-10呈负相关(P<0.05或P<0.01)。3.2.4新风胶囊治疗SS的临床疗效两组临床疗效进行比较显示,临床治愈率、显效率、总有效率方面无明显差异(P>0.05)。研究组有效率显著高于对照组(P<0.05)。3.2.5新风胶囊对SS患者凝血参数的影响与治疗前相比,治疗后两组FIB、D-D水平明显降低(P<0.05或P<0.01),且XFC组在降低凝血参数D-D方面优于HCQ组(P<0.05)。3.2.6新风胶囊对SS血瘀症状积分值的影响与治疗前相比,治疗后两组血瘀症状积分值均有所下降,XFC组血瘀症状总积分、肌肤甲错、唇色、舌质、脉象积分值下降明显(P<0.05或P<0.01)。且XFC组在降低血瘀症状总积分、唇色、舌质、脉象积分方面优于HCQ组(P<0.05或P<0.01)。3.2.7新风胶囊对SS临床体征、中医证候积分值的影响与治疗前相比,治疗后HCQ组口干咽燥、双目干涩、齿松发脱、体倦乏力、面色萎黄、食少纳呆、气短等积分值明显降低(P<0.05);XFC组静态唾液流率明显上升,口干咽燥、双目干涩、齿松发脱、体倦乏力、面色萎黄、食少纳呆、心悸、气短、便溏等积分值明显降低(P<0.0 1或P<0.0 5);且XFC组在升高静态唾液流率,降低口干咽燥、双目干涩、齿松发脱、体倦乏力、面色萎黄、食少纳呆等积分值方面明显优于对照组(P<0.0 1或P<0.0 5)。3.2.8新风胶囊对SS SF-36、SAS、SDS积分值的影响与治疗前相比,治疗后两组SF-36各维度积分均不同程度高于治疗前,而SAS、SDS评分低于治疗前;且XFC组在改善SF-36各维度及SAS、SDS评分方面优于HCQ组(P<0.0 1或P<0.0 5)。3.2.9新风胶囊对SS患者炎症指标的影响与治疗前相比,治疗后两组ESR、hs-CRP及ESSDAI积分值均明显下降,且XFC组在降低ESR、hs-CRP及ESSDAI积分值方面明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。3.2.10新风胶囊对SS患者miR-155的影响与治疗前相比,治疗后两组miR-155水平明显降低(P<0.01),且XFC组在降低miR-155水平方面优于HCQ组(P<0.05)。3.2.11新风胶囊对SS患者外周血细胞因子的影响与治疗前相比,治疗后两组外周血细胞因子IL-1β、TNF-α水平明显降低,IL-4、IL-10水平明显升高(P<0.01或P<0.0 5),且XFC组在下调TNF-α,上调IL-10方面优于HCQ组(P<0.0 1或P<0.0 5)。3.2.12新风胶囊对SS患者NF-кB信号通路的影响ELISA法检测结果显示:与治疗前相比,治疗后两组NF-кB P50、NF-кB P65、I?Bα水平明显下降,且XFC组在降低NF-кB P50、NF-кB P65水平方面优于HCQ组(P<0.0 1或P<0.0 5)。RT-PCR法检测结果显示:与治疗前相比,HCQ组P50、P65 m RNA表达明显下降(P<0.01),XFC组P50、P65、IκBαm RNA表达明显下降(P<0.01)。且XFC组在降低P50、P65、IκBαm RNA表达方面优于HCQ组(P<0.05或P<0.01)。Western Blotting法检测结果显示:与治疗前相比,两组治疗后P50、P65蛋白表达均明显下降,SOCS-1明显升高(P<0.05或P<0.01),且XFC组在降低P50、P65蛋白表达,升高SOCS-1蛋白表达方面优于HCQ组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。4.结论4.1 SS患者存在血瘀状态,且与脾胃虚弱关系密切;4.2 SS患者血瘀状态的形成与miR-155/NF-κB信号通路异常活化有关;4.3 XFC能显著改善SS患者临床症状及血瘀状态;4.4 XFC改善SS患者临床症状及血瘀状态的机制可能是:4.4.1降低炎症指标,减轻急性蛋白及免疫复合物的异常沉积,改善血瘀状态4.4.2上调抑炎因子,下调促炎因子,减轻对血管内皮细胞的损伤,从而维持凝血/纤溶系统的稳定,改善血瘀状态4.4.3直接抑制NF-κB信号通路,平衡炎症-细胞因子-凝血网络,减轻血管内皮细胞持续损伤,改善血瘀状态4.4.4降低miR-155,升高SOCS-1表达,进一步抑制NF-κB信号通路过度活化,改善血瘀状态