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目的内质网应激参与多种疾病的病理生理过程,其发挥效应与通路的激活联系紧密,尤其是PERK-eIF2α通路。近年来有多项研究表明阿托伐他汀(atorvastatin,ATV)具有抑制细胞凋亡作用,且可能与内质网应激有关,但相关通路尚不明确。本研究通过高葡萄糖培养H9C2大鼠心肌细胞建立内质网应激模型,观察内质网应激对心肌细胞凋亡的影响;进一步研究阿托伐他汀对内质网应激及心肌细胞凋亡的影响及其影响是否与PERK-eIF2α通路有关,为认识阿托伐他汀抗细胞凋亡作用及临床冠心病的治疗提供新的实验依据。方法1.H9C2大鼠心肌细胞,以10%胎牛血清+1%青链霉素的DMEM培养基培养,将培养好的细胞随机分为两组,分别为空白对照组和高糖组。空白对照组仅需DMEM培养基培养,高糖组需含17.6mmol/L葡萄糖的DMEM培养基培养。两组分别在0h、6h、12h、24h用MTT法检测细胞相对存活率,并用Western Blot检测内质网应激相关蛋白GRP78、PERK的表达水平。观察高糖能否诱导H9C2大鼠心肌细胞发生内质网应激,导致心肌细胞凋亡。2.实验步骤一表明随着时间延长,高糖诱导大鼠心肌细胞发生内质网应激,导致心肌细胞凋亡,在24h时,内质网应激相关蛋白表达水平显著上调,细胞相对存活率出现显著下降,遂实验步骤二选取时间点为24h。H9C2大鼠心肌细胞,以10%胎牛血清+1%青链霉素的DMEM培养基培养,为了研究阿托伐他汀对内质网应激及心肌细胞凋亡的影响,将培养好的细胞随机分为两组,分别为空白对照组与模型组。模型组分为三组,分别为高糖组、高糖+ATV组、高糖+Salubrinal组(Sal组),其中高糖+Sal组为阳性对照组。为了探讨ATV或者Salubrinal对正常培养条件下的心肌细胞内质网应激是否产生影响,实验除了设置空白对照组外,还设置了ATV组、Sal组。各组用MTT法检测细胞相对存活率,并用Western Blot检测PERK、eIF2α的表达水平。结果1.高糖0h组与空白对照0h组比较,GRP78的表达、PERK的表达、细胞相对存活率无统计学差异;高糖6h组、高糖12h组、高糖24h组分别和空白对照6h组、空白对照12h组、空白对照24h组比较,GRP78、PERK表达上调,细胞相对存活率下降。2.高糖组与空白对照组比较,PERK、eIF2α表达上调,细胞相对存活率下降。高糖+ATV组与高糖组比较,PERK、eIF2α表达下降,细胞相对存活率上升。高糖+Sal组与高糖组比较,eIF2α表达下降,细胞相对存活率上升,PERK的表达无统计学差异。ATV组、Sal组与空白对照组比较,ATV和Salubrinal本身对正常培养的细胞相对存活率和PERK、eIF2α的表达无统计学差异。结论1.高葡萄糖诱导大鼠心肌细胞发生内质网应激,导致心肌细胞凋亡。2.阿托伐他汀抑制内质网应激诱导的大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与下调PERK-eIF2α通路有关。