论文部分内容阅读
目的:本课题要先制定适用于气-质联用(GC-MS)技术的舌苔代谢组学的样本处理方法,对经过辩证慢性肾功能衰竭中医湿证、非湿证患者以及正常人舌苔液样本进行相关的代谢组学研究,通过研究慢性肾衰舌苔液中相关代谢改变与慢性肾功能衰竭中医湿证的关联性,为慢性肾衰中医湿证科学研究的标准化、微观化提供一些方法与思路。 方法:采集慢性肾衰患者舌苔液样本60例,经辨证后分为湿证组30例,非湿证组30例;对照组正常人舌苔样本25例。应用葵酸作为内标志物对所采集的样本进行硅烷化衍生处理,并通过GC-MS技术分析测试获得谱图,之后运用主成份分析、层次聚类分析、PCA分析、偏最小二乘法分析对湿证组、非湿证组及正常对照组之间进行比较,找出差异性的谱峰,同时通过METLIN数据库和HMDB数据库进行物质的鉴定。 结果:(1)将慢性肾衰患者舌苔与正常人进行比较,得到8个差异峰:rt486.016,rt2597.719,rt2509.719,rt2592.461,rt788.734,rt2579.969,rt2510.711,rt2508.608。差异代谢物为:尿嘧啶、羟基-赖氨酸、脱氧核糖、丝氨酸、甲基丁酸、鸟氨酸、抗坏血酸、苏氨酸。(2)对慢性肾衰湿证与非湿证患者的舌苔液进行代谢差异物的分析,得到差异峰6个:rt704.852,rt710.812,rt1035.985,rt713.422,rt698.516,rt711.688。再通过METLIN数据库和HMDB数据库进行物质的鉴定,差异代谢物为:丙二醇、甘氨酸、脯氨酸、尿酸、羟基-丁酸、半胱氨酸。(3)将湿证舌苔与正常人舌苔进行对比,得到差异峰8个:rt486.016,rt2597.719,rt2509.719,rt2592.461,rt2510.711,rt2459.75,rt2601.922,rt2556.969通过METLIN数据库和HMDB数据库进行物质的鉴定,差异代谢物为:、尿嘧啶、羟基-赖氨酸、脱氧核糖、丝氨酸、抗坏血酸、天(门)冬氨酸、组氨酸、氨基丙酸。其中有5种差异物质与慢性肾衰患者与正常人舌苔差异物重复。不同代谢物为:天(门)冬氨酸、组氨酸、氨基丙酸。 结论:(1).本实验对气相色谱质谱联用技术中舌苔的衍生方法、色谱质谱的检测条件进行改进,从而探索慢性肾衰中医湿证舌苔代谢组学研究的可行性。(2)运用气质联用技术对慢性肾衰患者和正常人的舌苔标本进行硅烷化预处理,质谱检测后,通过两样本t检验进行对比,得出8个差异峰具有显著差异(P<0.05)。这可能对慢性肾功能衰竭的前期筛查具有一定参考意义。(3)在气相色谱质谱联用技术基础上,对湿证与非湿证患者舌苔进行比较,通过两样本t检验进行对比,得出6个差异峰具有显著差异(P<0.05)。差异性代谢产物提示其可能与慢性。肾衰湿证具有较密切的关联性,为慢性肾衰湿证的生物学基础提供了一些可供参考的依据。(4)在气相色谱质谱联用技术基础上,对湿证与正常人舌苔进行比较,通过两样本t检验进行对比,得出8个差异峰具有显著差异(P<0.05)。其中有5种差异物质与慢性肾衰患者与正常人舌苔差异物重复。新差异物为:天(门)冬氨酸、组氨酸、氨基丙酸。这3种物质与中医湿证的关系还需进行更深入的研究。