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日本乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是由乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）感染引起的一种蚊媒传播的人兽共患传染病。JEV感染主要引起中枢神经系统炎症性疾病,强烈的炎症反应对脑组织产生破坏。自噬（Autophagy）是一种溶酶体降解过程,是维持体内平衡的一种高度保守过程,在病毒感染及细胞免疫方面起到重要作用。尽管已有体外试验证明抑制自噬途径可以有效减弱JEV的复制,保护细胞不受损伤。但病毒和自噬通路中的诸多信号分子的相互作用十分复杂,进一步研究自噬途径对体内JEV感染程度及宿主反应的影响显得尤为重要,同时为自噬调控药物更好的应用于临床试验治疗乙型脑炎提供有效的依据。本研究通过用自噬调控药物处理小鼠建立的乙型脑炎模型,小鼠腹腔注射JEV前2h,分别给予小鼠腹腔注射自噬诱导剂雷帕霉素Rapamycin（JEV+Rapa组）,自噬早期抑制剂渥漫青霉素Wortmannin（JEV+Wort组）及自噬晚期抑制剂氯喹Chloroquine（JEV+CQ组）,同时设立仅感染病毒的小鼠组（JEV组）、空白对照组（Control组）及单独给药组（Rapa组、Wort组、CQ组）,给药时间持续10d,小鼠饲养20d。观察自噬调控药物及病毒分别处理后小鼠的临床症状并统计小鼠生存率,利用病理学技术观察小鼠脑部损伤程度,分子生物学技术检测小鼠脑部JEV载量及炎性因子的分泌量,进一步研究小鼠体内自噬途径对病毒感染及宿主反应的影响。主要研究内容如下:1. 自噬调控药物对小鼠临床症状的影响小鼠饲养期间观察并统计发现JEV+Rapa组小鼠症状持续期较长为5-20d,且出现明显的立毛、弓背及运动功能障碍。JEV组小鼠症状持续期较短为5-12d,且出现明显的神经症状。JEV+Wort组小鼠仅在7-10d出现轻度的精神沉郁、立毛,之后恢复正常。其他组小鼠都无明显神经症状。JEV+Rapa组小鼠发病率为65.5%;JEV组小鼠发病率为32.7%;JEV+Wort组及JEV+CQ组小鼠发病率较低;其他组小鼠都无患病及死亡情况。初步发现自噬抑制剂Wort及CQ可减缓感染JEV小鼠神经症状的发生。2. 自噬调控药物对小鼠脑组织感染JEV程度的影响首先,利用透射电镜技术观察到JEV组小鼠脑组织自噬溶酶体出现且线粒体损伤;JEV+Rapa组小鼠脑组织自噬溶酶体存在且线粒体严重损伤;JEV+Wort组小鼠脑组织未见到自噬泡及自噬溶酶体出现且线粒体轻微损伤;JEV+CQ组小鼠脑组织可见双层膜的自噬泡形成,但线粒体轻微损伤。同时利用组织免疫荧光技术观察到JEV组小鼠脑组织有部分神经元出现自噬蛋白LC3与乙脑病毒蛋白JEV-E的共定位现象;JEV+Rapa组小鼠脑组织大量神经元出现自噬蛋白LC3与乙脑病毒蛋白JEV-E的共定位现象;其他组小鼠脑组织未观察到明显的共定位现象。此结果说明自噬抑制剂Wort及CQ减弱自噬途径与病毒感染的相互作用,减弱小鼠脑组织亚细胞结构水平的损坏。用RNAScope染色技术及免疫组织化学染色技术观察到JEV组小鼠脑组织中JEV主要分布于大脑皮质及丘脑;JEV+Rapa组小鼠JEV主要分布于大脑皮质、嗅结节、丘脑、中脑、脑桥、延髓;JEV+Wort组及JEV+CQ组小鼠脑组织中JEV主要分布于大脑皮质;其他组小鼠未检测到JEV分布。实时定量PCR（Q-PCR）技术检测发现JEV+Rapa组及JEV组小鼠病毒载量明显高于其他组小鼠(**P<0.01)。这些结果进一步说明自噬抑制剂Wort及CQ减弱自噬途径与病毒感染的相互作用,减弱小鼠脑组织中JEV的感染程度。3. 自噬调控药物对小鼠脑炎的影响JEV感染主要引起脑部强烈的炎症反应,光镜下观察脑组织的病理组织学变化发现JEV及JEV+Rapa组小鼠脑组织出现血管炎性反应及小胶质细胞增生现象;JEV+Wort及JEV+CQ组小鼠脑组织无明显血管炎性反应现象,有小胶质细胞增生现象;其他组小鼠脑组织无明显病理变化。利用实时定量PCR（Q-PCR）技术分别检测病毒感染后JEV组及JEV+Rapa组小鼠在病毒感染高峰期10d时脑组织炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α分泌量明显高于其他组(**P<0.01)。同时用Western blot技术评估PI3K/AKT及PERK通路对其下游信号的调节作用,JEV及JEV+Rapa组小鼠脑组织中PI3K、PAKT、PJNK、P65蛋白表达水平呈上调趋势（*P<0.05）,PERK无明显上调趋势。根据上述结果可以看出JEV感染会引起机体相关免疫通路的激活,自噬抑制剂Wort及CQ主要通过抑制PI3K/AKT/NF-кB通路的激活,减弱脑组织的炎性反应程度,对脑组织起到一定的保护作用。