【摘 要】
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急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是最常见的肾脏病急症之一,其死亡率和漏诊率高,可发展成慢性肾脏病和终末期肾病。一旦发现常为中晚期肾损伤,延误其早期治疗和预后。研究表明,在AKI早期,血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）和胱抑素C（cystatin C,Cys-C）水平明显上
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急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是最常见的肾脏病急症之一,其死亡率和漏诊率高,可发展成慢性肾脏病和终末期肾病。一旦发现常为中晚期肾损伤,延误其早期治疗和预后。研究表明,在AKI早期,血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）和胱抑素C（cystatin C,Cys-C）水平明显上升,NGAL和Cys-C的联合检测有助于急性肾损伤的早期诊断。目前常用的NGAL和Cys-C检测方法有酶联免疫吸附法、免疫比浊法、化学发光法,均存在着或依赖大型仪器、或操作繁琐等缺点,无法实现即时检测。荧光免疫层析技术具有灵敏度高、操作简单等优点,能较好的满足即时检测的需要,该技术可以填补目前检测NGAL和Cys-C的不足,为AKI的早期诊断提供一种新的手段。本研究旨在建立一种双色荧光免疫层析方法,结合基于智能手机的自研双色荧光免疫层析检测仪单个检测试纸条即可快速定量检测血清中NGAL和Cys-C,提高AKI的早期诊断,以便AKI的及早治疗和改善预后。将红色量子点荧光微球和NGAL抗体偶联,绿色量子点荧光微球和Cys-C抗体偶联,在硝酸纤维素膜上以羊抗鼠Ig G、NGAL捕获抗体和Cys-C捕获抗体分别作为质控线、NGAL检测线和Cys-C检测线,制备试纸条。对试纸条制备过程中红色量子点微球与NGAL抗体的偶联条件、绿色量子点微球与Cys-C抗体的偶联条件、标记缓冲液p H以及硝酸纤维素膜等影响试纸条性能的有关因素进行优化,并在优化的检测体系下对其性能进行评价。构建了一种联合定量检测血清NGAL和Cys-C的免疫层析试纸条。试纸条的NGAL和Cys-C的检测范围分别为0.1～100 ng·m L-1和0.5～100ng·m L-1,NGAL和Cys-C最低检出限分别为0.08 ng·m L-1和0.41 ng·m L-1。试纸条的NGAL和Cys-C的批内变异系数分别为2.6%和5.8%,NGAL和Cys-C的批间变异系数分别为5.1%和11.2%,重复性较好。试纸条的单通道样本NGAL和Cys-C的平均回收率分别为102.4%和92.4%,双通道样本的NGAL和Cys-C的平均回收率分别为105.0%和100.5%,平均回收率均在85%～115%之间。此外,试纸条的特异性较强,可低温保存一年,试纸条和酶联免疫吸附试剂盒分别检测6份血清样本,一致性良好。研制了一种联合快速定量检测人血清中NGAL和Cys-C水平的试纸条,为免疫层析法应用于临床上急性肾损伤的检测提供借鉴。
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