论文部分内容阅读
一、研究目的通过体内实验观察抗癌软坚方对人肝癌H22细胞小鼠移植瘤模型的抑瘤作用,评价其抗肿瘤的作用效果;通过体外实验观察抗癌软坚方对肝癌Huh7细胞增殖的影响及对IL-6信号通路与MicroRNA let-7a网络失衡的调节作用,探讨其抗肝癌的作用机制。二、实验内容1.抗癌软坚方对小鼠H22肝癌移植瘤的抑瘤作用建立小鼠H22肝癌移植瘤模型,分为模型对照组、抗癌软坚方高剂量组(49.0 g/kg)、低剂量组(24.5g/kg)和环磷酰胺(20mg/kg)治疗组,观察药物治疗8天后的抑瘤作用。结果显示与模型组比较,抗癌软坚方高、低剂量组和环磷酰胺组瘤重明显减小,差异均有显著性意义(P<0.01)。与模型组比较,抗癌软坚方高、低剂量组胸腺指数、脾指数差异均无显著性意义(P>0.05),但与环磷酰胺组比较,差异均有显著性意义(P<0.05),提示抗癌软坚方有较好的抑瘤作用。2.抗癌软坚方抗肝癌的药效作用及机理研究2.1抗癌软坚方对人肝癌Huh7细胞的增殖抑制作用体外实验采用人肝癌Huh7细胞,运用MTT法检测抗癌软坚方对Huh7细胞增殖的抑制作用。结果显示抗癌软坚方能明显地抑制肝癌Huh7细胞株的增殖,其作用有明显的量-效关系,其48h的IC50为55.46mg/ml;且抗癌软坚方高剂量组(48.0mg/ml)、低剂量组(24.0mg/ml)在24h、48h、72h三个时间段对人肝癌Huh7细胞的增殖均有明显的抑制作用,与对照组相比,差异均有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。2.2抗癌软坚方对人肝癌Huh7细胞IL-6信号通路与MicroRNA let-7a网络失衡的调节作用肝癌Huh7细胞经抗癌软坚方处理48h,其高剂量组(48.0mg/ml)、低剂量组(24.0mg/ml)Huh7细胞增殖均明显抑制、细胞上清液IL-6含量均明显下降,与对照组比较差异均具有显著意义(P<0.01)。抗癌软坚方处理后高、低剂量microRNA let-7a表达量明显上升、miR-21的表达显著下降,与对照组比较差异均具有显著意义(P<0.01);抗癌软坚方高、低剂量组与对照组比较,NF-κB/P65、STAT3、AKT2、K-ras、Bcl-2、c-myc基因mRNA的表达量均明显下降(P<0.01),而PTENmRNA的表达明显增加(P<0.01),并呈明显的量效关系。抗癌软坚方处理后高、低剂量PTEN的蛋白表达明显增加,STAT3和AKT2的蛋白表达明显减少,与对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.01)。三、结论1.抗癌软坚方体内对小鼠H22移植性肝癌模型有明显的抑瘤作用。2.抗癌软坚方体外对肝癌Huh7细胞的增殖有明显的抑制作用,其作用机制与抑制IL-6表达和IL-6/STAT3信号通路活化,调节IL-6信号通路与MicroRNA let-7a网络的失衡作用有关,进而抑制下游癌基因STAT3、AKT2、K-ras、Bcl-2、c-myc的表达,上调抑癌基因PTEN表达和抑制肝癌细胞增殖和生长,体现了中医药的整体调节优势。3.肿瘤相关内源性非编码小分子RNA--MicroRNA(miRNA),作为编码蛋白的肿瘤相关基因(如癌基因、抑癌基因)表达的上游调控分子,其表达异常与肝癌的发生密切相关,为肝癌发生的分子机制提供了新的思路,为肝癌的治疗提供了新的靶点。本文研究结果显示抗癌软坚方既可通过上调MicroRNA let-7a表达,抑制靶基因IL-6 mRNA和蛋白质表达;又可通过下调miR-21表达,提高靶基因PTEN mRNA和蛋白质表达,从而发挥抗癌作用,显示抗癌软坚方可通过调控肿瘤相关miRNA的表达发挥癌作用,从而丰富了中医药抗肿瘤作用的科学内涵,并为抗癌软坚方的临床应用提供了新的依据。