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到目前为止,猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV）在世界各国之间流行,给各国的生猪业带来了难以估计的经济亏损。PEDV对环境的耐受力强、传播途径广泛使其成为生猪业的难以预防的传染性疾病。目前,国内外针对PEDV进行了深度的研究,主要针对其特异性诊断和相关疫苗的研究。COE区是PEDV S蛋白中一段部分保护性抗原基因,本研究旨在获得PEDV S蛋白的COE区的强特异性抗原性的蛋白,并以此为基础为后续建立特异性ELISA检测方法奠定基础。根据已报道的PEDV S蛋白的COE区的抗原表位序列,设计引物,从患有PED死亡的仔猪肠道组织、淋巴结组织提取病毒RNA,提取病毒目的RNA、并反转录获取cDNA,通过PCR获取目的基因序列。并将目的基因连接入pMD-18T载体。测序鉴定目的基因,测序结果证明基因序列正确。通过生物学信息学分析,该基因编码的蛋白质含有6个含有潜在T淋巴细胞抗原决定簇（特定基序motif）,含有10个免疫优势辅助性T淋巴细胞抗原位点,抗原表位分析指数达1.7的片段有8个氨基酸序列区,疏水性分析为50%,适用于水溶性及脂溶性佐剂,该蛋白可形成3个结构域且位于S蛋白表面,表明该蛋白片段适用于作为抗原蛋白。经EcoR I和Hind III双酶切目的基因,将目的基因片段连接入原核表达载体PET-32a。经BamH I和Hind III双酶切目的基因,将目的基因片段连接入原核表达载体pMal c2x,成功构建目的片段原核表达载体PET-PSC和pMal-PSC。经IPTG诱导,大肠杆菌表达出目的蛋白。通过Ni-Agarose Resin亲和层析提取PET-PSC包涵体蛋白。经Amylose树脂纯化,获得pMal-PSC蛋白。昆明小鼠SPF级分4组,分别用206佐剂与目的蛋白PET-PSC,AL（OH）3与CPG与目的蛋白PET-PSC、单独目的蛋白PET-PSC以及PBS免疫小鼠,三次免疫后,取脾脏,做淋巴细胞增殖试验,用弗氏佐剂免疫小鼠测定血清中细胞因子INF-γ,IL-2,IL-4水平。经蛋白质印记检测,表明成功获得目的蛋白。经检验,采用弗氏佐剂的蛋白组引起的INF-γ增长水平显著高于对照组,差异显著（P<0.05）,试验蛋白组引起的IL-2增长水平显著高于对照,差异显著（P<0.05）,试验蛋白组引起的IL-4增长水平显著高于对照组,差异显著（P<0.05）,脾淋巴细胞增殖试验表明,采用AL（OH）3+CPG免疫佐剂的蛋白组SI值达3.5左右,显著高于未添加佐剂的抗原蛋白和PBS组,P<0.05,差异显著。采用206为免疫佐剂的蛋白组SI值达3.0,显著高于未添加佐剂的抗原蛋白和PBS组,P<0.05,差异显著。表明目的蛋白具有良好免疫原性。使用PET-PSC多克隆抗体为阳性样品,进行包被浓度的优化。确定pMal-PSC蛋白最适包被浓度为2μg/mL。使用pMal重组原核表达抗原作为阳性样品,进行检测ELISA方法的敏感性。结果显示抗体稀释至25600倍以后,其A450值结果仍显示在0.5以上。表明阳性血清抗体稀释到25600时仍可用于检测抗原蛋白。成功获得PEDV-PSC蛋白,经IL-2、IL-4、IFN-γ、淋巴细胞增殖试验检测PEDV-PSC蛋白有良好免疫原性。经ELISA敏感性检测PEDV-PSC蛋白具有高敏感性能够应用于ELISA检测方法。