抗性和敏感小菜蛾翅发育基因的克隆及热激表达研究

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小菜蛾Plutella xylostella属鳞翅目(Lepidoptera)菜蛾科(Plutellidae)昆虫,是寡食性害虫,对十字花科作物危害严重。其较强的生态适应性、抗药性和迁飞能力导致发生面积广,为害时间长,防治困难。实验室前期工作证实热胁迫下抗性小菜蛾翅出现翅形变异几率与翅脉损伤程度显著高于敏感小菜蛾,本论文为探究导致这些差异的原因,进行了小菜蛾翅发育相关基因克隆及热激表达研究,主要结果如下:1.运用RT-PCR和RACE技术,克隆得到小菜蛾翅发育相关基因dpp、srf的全长序列以及salm、ser的部分序列。dpp基因序列全长为1891bp,编码423个氨基酸,等电点为7.002,蛋白分子质量为47.31kDa,含有DWA和DWB结构域;srf基因序列全长为949bp,编码229个氨基酸,等电点为9.12,蛋白分子质量为25.81kDa,含有MADS结构域;salm基因部分序列长为1885bp,编码614个氨基酸,含有ZnF_C2H2结构域;ser基因部分序列长为1196bp,编码369个氨基酸,含有Coiled coil结构域。通过氨基酸序列比对和构建系统发育树,结果显示这些基因在小菜蛾与鳞翅目其他昆虫中的同源性较高。分析结果表明这些基因在鳞翅目昆虫翅的发育进化过程中具有较高的保守性,为进一步研究抗性和敏感小菜蛾翅发育基因热激表达差异奠定理论基础。2.对抗性和敏感小菜蛾的蛹按(44℃-1h、25℃-1h)、(42℃-4h、42℃-8h、25℃-8h)、(40℃-8h、40℃-16h、25℃-16h)、(38℃-48h、25℃-48h)四个处理组进行处理。然后运用RT-qPCR技术,测定上述4条基因的相对表达量。结果显示,44℃-1h、25℃-1h温度处理组,热胁迫后,相对于常温(25℃)处理,敏感小菜蛾蛹中dpp表达量显著上调,srf表达量显著下调,salm、ser表达量无明显变化;抗性小菜蛾蛹中dpp、ser表达量无明显变化,srf、salm表达量显著下调。42℃-4h、42℃-8h、25℃-8h温度处理组,热胁迫后,相对于常温(25℃)处理,抗性与敏感小菜蛾蛹中dpp、srf、salm、ser表达量在42℃-8h处理后均下调。40℃-8h、40℃-16h、25℃-16h处理组,相对于常温(25℃)处理,40℃-16h处理后,敏感小菜蛾蛹中dpp表达量无明显变化,srf、salm、ser表达量显著下调,抗性小菜蛾蛹中dpp、srf、salm、ser表达量均下调。38℃-48h、25℃-48h处理组,热胁迫后,相对于常温(25℃)处理,敏感小菜蛾蛹中dpp、srf、ser表达量均无明显变化,salm表达量下调;抗性小菜蛾蛹中dpp、ser表达量均无明显变化,srf、salm表达量均下调。总体结果表明,热胁迫条件下与敏感小菜蛾蛹相比,抗性小菜蛾蛹中上述4条翅发育相关基因表达量较低,且更显著下调。我们推测,在热胁迫条件下,抗性小菜蛾翅出现翅形变异机率与翅脉损伤程度更大,可能与翅发育相关基因表达量较低以及较大的下调幅度有关。
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