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第一部分Hep-2细胞对呼吸道合胞病毒的敏感性的测定
目的：检测人喉癌上皮细胞(Hep-2)对呼吸道合胞病毒(RSV)的敏感性。方法：采用RSV接种Hep-2，观察细胞病变效应(CPE)出现的时间、病变完全的时间及病变特征；采用直接免疫荧光(DFA)法测定病毒抗原表达，间接反映细胞中病毒含量。结果：接种病毒后，Hep-2细胞第2天出现病变，第3天病变完全，且可见明显的合胞体形成。DFA检测结果显示，Hep-2细胞荧光强度很强(()～())，间接反映出RSV在Hep-2细胞中表达很高。结论：Hep-2细胞对RSV敏感性较高，并且其CPE具有明显的形态特征，是一种比较适合用于扩增、分离RSV的细胞。
第二部分呼吸道合胞病毒诱导致敏小鼠建立病毒性哮喘模型及病理生理特征
目的：评价用呼吸道合胞病毒(RSV)诱导鸡卵白蛋白(OVA)致敏，建立小鼠急性病毒性哮喘模型的方法及效果。方法：Balb/C小鼠100只，随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、OVA/RSV组、PBS/RSV组、RSV/RSV组和OVA/PBS组5组。应用OVA多点注射致敏、OVA气道雾化吸入结合RSV滴鼻激发复制急性病毒性哮喘模型。观察小鼠哮喘急性发作症状；动物体描箱法测定乙酰胆碱(Ach)激发条件下气道反应性(以肺阻力RL表示)；支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞分类计数；苏木精一伊圣工(HE)染色观察肺组织病理变化。结果：①以45、135、405μg/mL Ach浓度激发时，与其他各组比较，OVA/RSV组RL均显著升高(P均<0.01)。②BALF中炎性细胞分类计数，与其他各组比较，OVA/RSV组的细胞总数、淋巴细胞，嗜酸性粒细胞、中性粒细胞均显著升高(P均<0.01).③OVA/RSV组的肺组织病变程度重于其他各组(P均<0.01)。
结论：RSV诱导OVA致敏的方法建立小鼠急性病毒性哮喘模型是成功的。
第三部分呼吸道合胞病毒对致敏小鼠气道炎症及Th1/Th2亚群平衡性的影响
目的：观察呼吸道合胞病毒(RSV)对致敏小鼠气道炎症及Th1/Th2亚群平衡性变化的影响.方法：Balb/C小鼠100只，随机分为PBS对照组、OVA/RSV组、RSV/RSV组和OVA/PBS组5组。应用OVA多点注射致敏、OVA气道雾化吸入结合RSV滴鼻激发复制急性病毒性哮喘模型。BALF作细胞分类计数；酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BALF上清中白细胞介素(IL)-4、IL-5、干扰素(IFN)-γ含量；HE染色观察肺病理变化。结果：①BALF中炎性细胞分类计数，与其他各组比较，OVA/RSV组的细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞均显著升高(P均<0.01)。②BALF上清中各细胞因子水平，与PBS对照组比较，RSV/PBS组、RSV/RSV组的IFN-γ均升高，其中RSV/RSV组的升高更明显(P均<0.01)；OVA/PBS组则是IL-4、IL-5含量增加更为明显(P均<0.01).OVA/RSV组IFN-γ、IL-4、IL-5的含量均较其它各模型组显著增加(P均<0.01)。③OVA/RSV组的肺组织病变程度重于其他各组(P均<0.01)。结论：OVA致敏小鼠RSV感染后可明显加重气道炎症，Th1、Th2型炎症均加强，且以Th2型炎症加重为主。
第四部分三拗汤类方及成分对呼吸道合胞病毒诱导的致敏小鼠作用研究
目的：观察三拗汤类方及成分对呼吸道合胞病毒(RSV)诱导的哮喘小鼠气道炎症和Th1/Th2亚群平衡性的影响，比较各方的作用效果，筛选出最佳对症方剂。方法：在对三拗汤类方的研究中，Balb/C小鼠随机分为11组，每组20只，分别为PBS对照组，OVA/RSV组，DM组，SAD-S组，SAD-L组，ACPI-S组，ACPI-L组，ACP II-S组，ACP II-L组，ACPIII-S组，ACPIII-L组；在对三拗汤类方的成分的研究中，Balb/C小鼠随机分为11组，每组20只，分别为PBS对照组，OVA/RSV组，DM组，SAD-VO组，SAD-AE组，ACPI-VO组，ACPI-AE组，ACPII-VO组，ACPII-AE组，ACPIII-VO组，ACPIII-AE组。应用OVA多点注射致敏、OVA气道雾化吸入结合RSV滴鼻激发复制急性病毒性哮喘模型。动物体描箱法测定Ach激发条件下气道反应性(RL)；BALF作细胞分类计数；ELISA法测定BALF上清中IL-4、IL-5、IFN-γ含量；HE染色观察肺病理变化。结果：以45、135，405μg/mL Ach浓度激发时，与PBS对照组比，OVA/RSV组RL增高值(与基值比较)均明显升高(P<05，P<0.01)；BALF中细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞炎性细胞均显著升高(P均<0.01)；BALF上清夜中IFN-γ及IL-4、IL-5含量均升高(P<0.01)，其中IL-4、IL-5含量升高更为明显(P均<0.01)；OVA/RSV组的肺组织病变程度十分严重(P均<0.01).应用药物后气道反应性均显著降低(P<0.05，P<0.01)；各给药组细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞数量与OVA/RSV组比均明显降低(P均<0.01)，其中中性粒细胞降低更为显著(P均<0.01)；各给药组IFN-γ，IL-4、IL-5的含量均较OVA/RSV组明显降低(P<0.05，P<0.01)；药物应用后能减轻支气管周围炎的病变程度；其中ACPIII对各种指证哮喘的指标均有较强的抑制作用。通过对ACPIII成分的进一步研究分析，ACPIII-VO、ACPIII-AE均使中性粒细胞显著降低，ACPIII-VO的抑制作用尤其强烈。结论：三拗汤类方对病毒性哮喘模型有一定的治疗作用，其中ACPIII治疗效果较好，其部分作用机制可能是ACPIII通过其所含有的挥发油成分降低中性粒细胞而对病毒性哮喘有针对性的治疗作用，从而也能进一步证实中性粒细胞是病毒性哮喘的关键细胞。