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背景及目的:膀胱肿瘤居泌尿系肿瘤第一位,易复发,尽管对保留膀胱患者行膀胱灌注治疗,但仍存在高复发率,尚未有令人满意的药物。中医药在治疗、康复、养生等方面具有独特的优势,但在防治膀胱肿瘤的研究尚不多见。近年来研究发现,苦参素能抑制乳腺癌、肺癌及胃癌等细胞生长。还未见有对膀胱肿瘤抑制作用的报道。现通过苦参素作用于体外培养的T24细胞,研究苦参素在不同浓度和不同时间下对T24细胞的抑制作用及其相关机制。方法:1. MTT法研究苦参素不同浓度作用不同时间对T24细胞的抑制作用,光镜及电镜下观察苦参素对T24细胞形态学变化,FCM分析T24细胞药物处理前后周期改变及有无凋亡细胞。2. 采用免疫细胞化学法,研究与T24细胞凋亡密切相关癌基因和抑癌基因:P53、 Bcl-2、Bax等蛋白的表达,Bcl-2/Bax比值以及凋亡相关蛋白酶Caspase-3变化,探讨苦参素诱导T24细胞凋亡的机制。结果:1. MTT法观察到0.625mg/ml~10mg/ml的苦参素对T24细胞作用72h后的抑制率为13.75~91.03%,呈时间和剂量依赖性,IC50为1.82mg/ml。1.25mg/ml苦参素作用72h后,光镜下见细胞体积缩小,胞质浓缩,胞核凝聚,位于核周膜成新月状。电镜下癌细胞核浆比例缩小,核仁减小,与临近细胞的连接丧失,失去微绒毛,细胞膜内陷<WP=7>细胞分割成为多个凋亡小体。苦参素2.5mg/ml作用72h后,见到大量坏死细胞,呈气球样改变,内质网、线粒体等细胞器肿胀破坏崩解。FCM检测显示,阴性对照组G0/G1期43.31%,S期54.10%,G2/M期2.59%; 1.25mg/ml苦参素作用72h后分别是54.52%, 44.42%,1.06%,凋亡率是5.37%;2.5mg/ml苦参素作用72h后是52.41%,40.59%,6.99%,未能分析出调亡峰。 2免疫细胞化学法结果显示:对照组T24细胞P53阳性率为76.25%,Bcl-2为64.38%,Bax为27.38%,Caspase-3为18.13%;1.25mg/ml苦参素作用72小时后,分别是25.75%,27.13%, 58.25%, 38.5%,与对照组相比其差异具有统计学意义。结论:1. 苦参素对T24细胞生长有抑制作用,从浓度1.25mg/ml起就有明显抑制作用,10mg/ml苦参素的抑制率可达91.03%,呈时间剂量依赖性。苦参素可诱导T24细胞凋亡,1.25mg/ml苦参素作用72h后,光镜及电镜下均可见典型的凋亡细胞;2.5mg/ml苦参素作用72h后见大量坏死细胞。FCM检测到药物处理后T24细胞出现G0/G1周期阻滞, S期细胞较阴性对照组明显下降,并且有凋亡峰出现。2. 苦参素作用于T24细胞后,P53蛋白和Bcl-2蛋白表达下调, Bax蛋白表达上调,减小Bcl-2/Bax的比值,上调Caspase-3的表达,诱导T24细胞凋亡。