胚胎停育是指妊娠早期胚胎发育自然终止和胚胎丢失的病理过程,多发生于妊娠12周以内，在育龄期妇女中的发病率为15～20%[1]，B超下的表现为妊娠囊内胎芽或胎儿形态不整，无胎心搏动或表现为枯萎囊等[2]。其妊娠结局常为稽留流产或不全流产，临床处理较困难，治疗效果欠佳，严重的影响了患者的工作与生活。目前认为，胚胎停育是一个多因素参与的复杂的病理过程，病因十分复杂，主要包括染色体异常、子宫畸形、内分泌失调、感染性疾病、环境污染等因素[3-4]，除此以外，仍有大约50%的患者病因尚不明确[5]。近年来，随着其发病率的上升，国内外学者愈发重视对不明原因胚胎停育的病因研究。信号转导和转录活化因子(signal transducers and activators of transcription,STAT)在细胞因子的信号转导中起着关键性的作用，是生长调节中的主要调控者[12]。IL-6是JAKs (janus激酶)成员之一，可以有选择地使STATs通过酪氨酸和丝氨酸残基的磷酸化为p-STATs，进而诱导相应的靶基因如Survivin、MMP-2、VEGF等的表达，介导多种细胞因子和生长因子信号的传导,参与细胞生长、增殖、分化、及凋亡等生理功能的调控[13]。Survivin是凋亡抑制蛋白IAP家族中抗凋亡作用最强的成员，多表达于人类的肿瘤细胞、绒毛的滋养细胞等组织中，具有抑制细胞凋亡及调节细胞有丝分裂的作用；此外，研究报道Survivin在促进滋养细胞生长、浸润和胎盘形成的过程中起重要作用。基质金属蛋白酶（MatrixMetalloproteinases，MMPs)是一类几乎能降解细胞外基质中所有成分的蛋白水解酶,在细胞侵袭、转移中起关键性作用。MMP-2(明胶酶A)是基质金属蛋白酶家族主要成员之一，孕早期主要由滋养细胞产生,在早期胚胎的植入、子宫内膜血管的生成和维持过程中发挥重要的作用。目前，国内外许多研究报道JAK-Stat3信号转导通路在滋养细胞分化及侵袭过程中起到了重要的作用，而有关该通路是否参与了胚胎停止发育的发病过程以及在胚胎停止发育中的作用还鲜有报道。本研究通过检测IL-6、Stat-3、p-Stat3、Survivin及MMP-2的mRNA和蛋白水平在胚胎停育组和正常妊娠妇女绒毛组织中的表达情况，初步探讨其在胚胎停育发病机制中的作用及意义。目的本研究通过比较妊娠早期胚胎停育组和正常对照组绒毛组织中IL-6、Stat-3、p-Stat3、Survivin及MMP-2的mRNA和蛋白的表达有无差异，免疫组化定位IL-6、Stat-3、p-Stat3、Survivin及MMP-2在两组绒毛组织中的位置，初步探讨Stat3信号传导通路在胚胎停育发病机制中的作用。材料和方法1研究对象选取2012年7月至12月就诊于郑州大学第三附属医院行清宫术的胚胎停育患者30例为胚胎停育组,诊断标准参照美国超声放射医生协会提出的评估标准，B超符合：头臀长度≥7mm且无心跳；孕囊平均直径≥25mm且无胚胎；检查出无卵黄囊的孕囊2周后不见有心跳的胚胎；检查出有卵黄囊的孕囊11天后仍不见有心跳。选择同期正常早孕自愿要求终止妊娠者30例为正常对照组, B超提示宫内妊娠,有胚胎原始心管搏动,既往无不良孕产史。以上两组研究对象均符合以下条件：以上两组研究对象均符合以下条件：⑴停经12周以内、既往无不良妊娠史⑵无严重的内科疾病、传染性疾病、感染等疾病⑶无生殖道畸形⑷无染色体核型异常⑸无内分泌异常⑹无自身抗体等相关疾病。本研究经本院伦理委员会批准,标本提供者均知情同意。2实验方法采集离体新鲜绒毛组织约2～5g，立即用生理盐水洗净，无菌滤纸反复吸取绒毛组织中的血液，用无菌组织剪分为两份，一部分用10%福尔马林固定（用于免疫组化研究），一部分装入无菌冻存管内后迅速放入液氮罐内（用于mRNA及蛋白提取），以上所有步骤均在绒毛组织离体后15min内完成。最后10%福尔马林固定的组织在室温条件下保存，液氮罐内的组织放入－80℃冰箱内冻存备用。采用Real-time PCR，Western blot的技术，比较胚胎停育组和正常妊娠组绒毛组织中IL-6、Stat3、p-Stat3、Survivin、MMP-2的mRNA及蛋白的表达的有无差异，免疫组化定位IL-6、Stat3、p-Stat3、Survivin、MMP-2胚胎停育组和正常妊娠组绒毛组织中的定位表达情况。3统计学处理实验所得数据采用SPSS17.0软件进行统计学的分析，定量资料均以(X S)表示，符合正态分布的计量资料采用独立样本的t检验，不符合正态分布的计量资料采用秩和检验，有序多分类资料采用秩和检验，以=0.05为检验水准。结果1胚胎停育组和正常对照组一般临床资料比较胚胎停育组与正常对照组孕妇平均年龄、停经天数、孕次、产次、孕囊大小比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（见表3.1）2胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中IL-6、Stat3、Survivin和MMP-2mRNA的表达2.1胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中IL-6mRNA的表达两组孕妇绒毛组织中均可检测到IL-6mRNA的表达，胚胎停育组IL-6mRNA相对表达量为1.18±0.51，正常对照组为2.14±1.3，胚胎停育组IL-6mRNA表达水平明显低于正常对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.2胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中Stat3mRNA的表达两组孕妇绒毛组织中均可检测到Stat3mRNA的表达，胚胎停育组Stat3mRNA相对表达量为1.35±0.11,正常对照组为1.13±0.15，两组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。2.3胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中Survivin mRNA的表达两组孕产妇胎盘组织中均可检测到Survivin mRNA的表达，胚胎停育组及正常对照组Survivin mRNA相对表达量分别为0.12±0.01，0.91±0.58，胚胎停育组Survivin mRNA表达水平低于正常对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.4胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中MMP-2mRNA的表达两组孕妇绒毛组织中均可检测到MMP-2mRNA的表达，胚胎停育组MMP-2mRNA相对表达量为1.28±1.57，正常对照组为0.18±0.38，胚胎停育组MMP-2mRNA表达水平高于正常对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。3胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中IL-6、Stat3、p-Stat3、Survivin和MMP-2蛋白的表达定位IL-6, Stat3,p-Stat3,Survivin及MMP-2在两组绒毛组织中的合体、细胞滋养层细胞均有不同程度的阳性表达，呈棕黄色或黄褐色染色，IL-6, Stat3, MMP-2均主要定位于滋养细胞细胞膜及细胞质中，而p-Stat3，Survivin主要定位于滋养细胞细胞核中。4胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中IL-6、Stat3、p-Stat3、Survivin和MMP-2蛋白表达变化4.1胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中IL-6蛋白的表达Westernblot结果分析显示，胚胎停育组绒毛组织中IL-6蛋白的相对表达量为0.14±0.10,正常对照组为0.33±0.16，IL-6蛋白在胚胎停育组中的相对表达量低于正常对照组，两组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）4.2胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中Stat3蛋白的表达胚胎停育组绒毛组织中Stat3蛋白的相对表达量为0.35±0.02，正常对照组为0.36±0.03，两组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。4.3胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中p-Stat3蛋白的表达胚胎停育组绒毛组织中p-Stat3蛋白的相对表达量为0.19±0.01，正常对照组为0.05±0.01，胚胎停育组中p-Stat3蛋白相对表达量低于正常对照组，两组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。4.4胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中Survivin蛋白的表达胚胎停育组绒毛组织中Survivin蛋白的相对表达量为0.48±0.04，正常对照组为0.14±0.01，Survivin蛋白在胚胎停育组中的相对表达量低于正常对照组，两组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。4.5胚胎停育组与正常对照组绒毛组织中MMP-2蛋白的表达胚胎停育组绒毛组织中MMP-2蛋白的相对表达量为0.63±0.11，正常对照组为0.19±0.14，MMP-2蛋白在胚胎停育组中的相对表达量高于正常对照组，两组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。结论胚胎停育患者绒毛组织中IL-6，p-Stat3，Survivin的表达量下降，MMP-2的表达量升高，可能参与胚胎停育的发病过程。