四川边茶对脂肪酸合酶抑制作用的研究

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脂肪酸合酶(E.C.2.1.3.85,FAS)是参与体内能量代谢的一种重要的酶,它以FASⅠ和FASⅡ两种形式存在。近期的研究发现FASⅠ是治疗肥胖症和新的癌症化疗的潜在双重靶点,而FASⅡ(FabG)抑制剂则有可能成为新型的抗生素;3T3—L1前脂肪细胞是向脂肪细胞的形态转变前体,抑制前脂肪细胞分化即可减少脂肪细胞的增殖。四川边茶(康砖)是黑茶的一个主要品种,本论文以对边茶提取物对FASⅠ和FabG的抑制作用,对FASⅠ抑制动力学特征、作用方式和部位,最佳提取条件及边茶泡茶方式的效率,以及对3T3—L1前脂肪细胞分化的抑制等问题进行了探索研究,并进行了相关的分析讨论。实验结果表明:1.边茶最佳萃取剂为50%左右的乙醇,在常温下2~3 h即可接近最佳萃取效果。虽然和红茶及绿茶相似,但边茶的纯水萃取效果要好于绿茶和红茶,且温度较高的水提取效果更好;2.开水浸泡边茶的方法1小时可获得最佳萃取条件下29%的抑制能力,二次泡茶1小时还可以得到类似的抑制能力,两次即可得到超过50%的有效物,比绿茶的开水浸泡效率高出1倍;3.四川边茶的提取物能够抑制动物脂肪酸合酶(FASⅠ)的活性,不同年份的边茶提取物对FAS全反应的抑制能力不同,1972年的边茶提取物对FAS的抑制能力最低(IC50值为14.85μg/ml),2001年的边茶对FAS的抑制作用最强(IC50值为5.31μg/ml),抑制能力约是1972年的3倍;4.边茶提取物对FASⅠ还表现出较强时间依赖性的不可逆失活作用,其一级失活速度常数分别为:0.127(min.mg tea/ml)-1(快相)和12.1×10-3(min.mgtea/ml)-1(慢相)。且对酮酰还原反应(KR)有较强抑制,但对没有全反应显著,说明KR功能域不是边茶提取物抑制FASⅠ的主要作用部位;5.边茶提取物与底物乙酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A的竞争性质都是竞争性与非竞争性的混合型,这与绿茶对底物的竞争性关系有所差异,这说明两大茶类对FASⅠ的抑制有效物有所不同;6.边茶提取物对FASⅡ的β酮酰还原酶(FabG)的抑制作用较强,这与对FASⅠ中酮酰还原反应(KR)的抑制效果相似;但对FabG的抑制和对FASⅠ中KR的抑制能力却不一致,提取物对两者失活的表现一级速度常数分别为0.116(min.mg tea/ml)-1和0.164(min.mg tea/ml)-1。去掉抑制剂浓度的影响,其二级速度常数k2分别为5.48×10-3(min.mg tea/ml)-1和6.76×10-3(min.mg tea/ml)-1。这可能与它们结构上的差异有关;7.边茶萃取液对抑制3T3—L1前脂肪细胞分化、抑制脂肪积累具有一定的作用。但对其抑制表现与对FASⅠ和对FabG的抑制有较大差异,在抑制FAS活性实验中效果较好的2001年、1985年等边茶对3T3—L1前脂肪细胞的抑制能力与分化对照组差异却不明显;而抑制能力较差的1972年边茶效果最好,是分化对照组的86.8%,与对照有显著差异(P<0.05)。8.边茶提取物分离去除茶黄素和茶红素后,含茶褐素组分的抑制能力与边茶提取物的抑制能力接近,说明这一组分仍保持了原有的大部分抑制活性。由于这个组分并未提纯,茶褐素只占一部分,因此分析茶褐素可能是边茶中抑制FAS的主要活性成分。
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